بررسي تهيه آنزيم هاي ليزوزيم و ناتوكيناز در سوبستراي كيتيني پوسته Litopenaeus vannamei و Portunus pelagicus

Investigation of the preparationof lysozyme and nattokinase enzymes in chitinous shells media of Litopenaeus vannamei and Portunus pelagicus

در اين تحقيق، توليد آنزيم‌هاي ليزوزيم و ناتوكيناز توسط باكتري‌هاي انتخابي در محيط كشت حاوي پودر پوسته‌هاي كيتيني ميگوي Litopenaeus vannamei و خرچنگ Portunus pelagicus ارزيابي شد. نمونه‌هاي ميگو از بازار ماهي فروشان در خرمشهر جمع‌آوري شد. نمونه‌برداري خرچنگ نيز از نواحي بين جزر و مدي سواحل خوزستان در خليج فارس انجام شد. جهت سنجش ميزان فعاليت آنزيم ليزوزيم از روش‌هاي رنگ‌سنجي در سوبستراي اتيلن گليكول كيتين و ليزوپليت در سوبستراي M. luteus و جهت تاييد توليد آنزيم ناتوكيناز از روش ليز شدن لخته خون استفاده گرديد. نتايج نشان داد كه ميزان واحد آنزيمي ليزوزيم سويه P. aeroginosa در روش ليزوپليت U/ml 47/6، در روش رنگ سنجي معادل U/ml 2/35 و ميزان NAG آزاد شده حاصل از فعاليت آن، mg/ml 091/0 و ميانگين فعاليت آنزيم ناتوكيناز خام توليدي سويه B. subtilis، 4/37 درصد بود. بنابراين، علاوه بر حذف موفقيت‌آميز پسماندهاي كيتيني از محيط زيست و استحصال كيتين خالص مي‌توان با استفاده از باكتري‌هاي انتخابي، آنزيم‌هاي ليزوزيم و ناتوكيناز را توليد نمود. آنزيم‌هاي مذكور، پس از بهينه‌سازي صنعتي، در پزشكي و داروسازي مورد استفاده قرار مي‌گيرند. كليدواژه‌ها

In this research, production of lysozyme and nattokinase enzymes by selected bacteria in chitinous shells culture media of Litopenaeus vannamei and Portunus pelagicus were evaluated. Shrimp specimens were collected from fish market centers in Khorramshahr. Crab sampling was undertaken from intertidal areas of Khuzestan coasts, Persian Gulf. For lysozyme enzyme activity, colorimetric assay with ethylene glycol chitin and lysoplate method with M. luteus as substrate were applied. To evaluate nattokinase production, human blood clot lyses method was used. Results showed that unit of lysozyme activity for P. aeroginosa with lysoplate method was 6.47μg/ml, colorimetric method was 35.2 U/ml and NAG released by enzyme activity was 0.091 mg/ml, respectively. Average unit of nattokinase activity for B. subtilis was also %37.4. Therefore, in addition to successful removal of chitinous wastes from environment and extraction of pure chitin, it is possible to manufacture lysozyme and nattokinase enzymes with selected bacteria. These enzymes can be used in medical and pharmaceutical applications after industrial optimization.