جداسازي، شناسائي و ارزيابي مولكولي فاكتورهاي ژني مقاومت آنتي‌بيوتيكي در اشريشيا كلي‌هاي بيماريزا

Isolation, characterization and molecular evaluation of genetic factors of antibiotic resistance in pathogenic Escherichia coli

استفاده از آنتي بيوتيك‌ها در دامپزشكي باعث ظهور، شيوع و انتشار مقاومت آنتي‌بيوتيكي در باكتري‌هاي جدا شده از حيوانات توليد كننده مواد غذايي مي‌شوند. آنتي‌بيوتيك‌ها براي درمان عفونت‌هاي باكتريايي در گاو ضروري است. كلاس يك اينتگرون مي‌تواند ژن‌هاي مقاومت آنتي‌بيوتيكي را در باكتري اشريشيا كلي جدا شده از حيوانات گسترش دهد. هدف از اين مطالعه بررسي الگوي مقاومت آنتي‌بيوتيك و تعيين ميزان فراواني كلاس يك اينتگرون درميان سويه‌هاي اشريشيا كلي جدا شده از گوساله‌هاي مبتلا به اسهال در استان فارس بود. حضور عوامل بيماري‌زا مرتبط با اسهال در يك صد و بيست نمونه از 120 گوساله متفاوت مبتلا به اسهال در نقاط مختلف استان فارس ارزيابي شد. پس از جداسازي، اشريشيا كلي براساس خصوصيات كشت، مورفولوژي و بيوشيميايي شناسايي شد، شيوع ژن‌هاي بيماري‌زاي اشريشيا كلي انتروتوكسيژنيك (Sta, F41, K99) اشريشيا كلي انتروهموراژيك (eae, Stx1, Stx2) با استفاده از تكنيك Multiplex PCR بررسي شد. آزمون PCR و روش انتشار ديسك توسط 8 آنتي‌بيوتيك براي تشخيص ژن‌هاي بيماريزا، كلاس يك اينتگرون و الگوي حساسيت آنتي‌بيوتيكي انجام شد. از 120 مورد، 57 نمونه كشت مثبت براي اشريشيا كلي بدست آمد و 35 نمونه به عنوان اشريشيا كلي پاتوژن شناسايي شد كه شامل (8/36 درصد) 21 مورد اشريشيا كلي انتروتوكسيژنيك و (5/24 درصد) 14نمونه اشريشيا كلي انتروهموراژيك بودند. بيشترين ميزان مقاومت در اريترومايسين (100 درصد)، پني سيلين (100 درصد)، كوتريموكسازول (100 درصد)، تتراسايكلين (5/91 درصد)، آمپي‌سيلين (5/88 درصد)، كلرامفنيكل (83 درصد) ديده شد، همه جدايه‌ها داراي مقاومت چندگانه دارويي بودند. بر اساس نتايج مطالعه مولكولي، كلاس يك اينتگرون در 75/48 درصد از نمونه‌ها يافت شد. نتايج اين تحقيق نشان مي‌دهد كه مقاومت چندگانه دارويي و كلاس يك اينتگرون در اشريشيا كلي جدا شده از گوساله‌ها در استان فارس رايج هستند.

The usage of antimicrobial drugs in the veterinary field can cause the emergence, prevalence, and dissemination of antimicrobial resistance in bacteria isolated from food-producing animals. Antimicrobial drugs are essential for the treatment of bacterial infections in cattle. Class 1 integrons can extend antibiotic resistance genes among bacteria Escherichia coli from animal.The objective of this study was to investigate the antimicrobial resistance pattern and the frequency class 1 integrons Escherichia coli strains isolated from diarrheic calves in Fars province. A one hundred and twenty samples from 120 different diarrheic calves from Fars province in Iran were screened for the presence of virulence factors associated with diarrhea. Following isolation and identification of Escherichia coli strains on the basis of cultural, morphological and biochemical properties, the presence of various virulence genes of ETEC (k99, F41 fimbria and Sta), EHEC (Stx1, Stx2 and eae) was investigated by multiplex PCR. The isolates were examined for susceptibility to antimicrobial agent and class 1 integrons using PCR and agar disk-diffusion method for 8 antimicrobial agents. Out of 120 samples, 57 (47/5%) were found to be positive for Escherichia coli and 35 of them identified as pathogenic Escherichia coli including 21( 36/8%) and 14 (24/5%) ETEC and EHEC strains respectively. The most antibiotic resistance level was seen against erythromycin (100%), penicillin (100%) co-trimoxazole (100%), tetracycline (91/5%), ampicillin (88/5%) and chloramphenicol (83%). All isolates shown MDR . The study of molecular results showed that class 1 integron was detected in (48/75%) of isolates. Our data demonstrate the presence of MDR and class 1 integrons were common in Escherichia coli from calves in Fars province experiencing problems with neonatal diarrhea.