بررسي و شناسايي گونه ها و بيووارهاي بروسلا در گاوها با روش واكنش زنجيره اي پليمراز چندگانه

Evaluation and Diagnosis of Species and Biovars of Brucella among cattles by Multiplex Polymerase Chain Reaction

زمينه و اهداف: بروسلوزيس يك بيماري عفوني زئونوتيك است كه مسئول اختلالات در باروري جانوران و زيان‌ هاي اقتصادي قابل‌ توجهي در زنجيره گوشت و شير مي‌ شود و به دليل اينكه يك بيماري آنتروپوزئونوز مزمن است، اختلالاتي را در باروري جانوران به وجود مي‌ آورد؛ بنابراين هدف از انجام اين پژوهش، بررسي و تشخيص گونه‌ ها و تعيين سويه‌ هاي مولّدِ عفونت در گاوهاي مبتلا با روش واكنش زنجيره‌ اي پليمراز ِچندگانه است. مواد و روش كار: در مطالعه پيش رو از 22 گاو مبتلا به بروسلوزيس كه داراي تست هاي PCR مثبت بودند، نمونه گيري خون انجام شد و سپس نمونه‌ ها در محيط كشت خون BACTEC و در دماي 37 درجه سليسيوس به مدت 5 روز انكوبه و پس از آن هر نمونه روي يك پيلت حاوي بروسلا آگار كشت داده شد. در تست PCR براي تشخيص بروسلا از پرايمر 16SrRNA مخصوص جنس و براي تشخيص گونه و بيووارها از پرايمر bcsp31 استفاده شد. محصول PCR با ژل آگارز 1 درصد الكتروفورز و با سويه‌ هاي استاندارد مقايسه شد. يافته‌ ها: با انجام PCR براي تشخيص جنس بروسلا از نمونه‌ هاي جمع‌ آوري‌ شده گاوها، 22 مورد مثبت بود. از 22 نمونه مثبت 19 نمونه به‌ عنوان بروسلا آبورتوس بيووار (1، 2، 3، 4، 5) و 3 نمونه به‌ عنوان بروسلا ملي تنسيس بيووار (1، 2، 3) شناسايي شدند. نتيجه‌ گيري: بيووارهاي 1 و 3 بروسلا آبورتوس و بيووارهاي 1 بروسلا ملي تنسيس، بيووارهاي شايع در بين گاوهاي استان لرستان هستند. استفاده از روش واكنش زنجيره‌ اي پليمراز چندگانه در آزمايشگاه‌ هاي تشخيصي موجب ارتقاي سطح كيفي مي‌شود و سرعت تشخيص را افزايش مي‌ دهد.

Background and Aims: Brucellosis is an infectious zoonotic disease responsible for reproductive disorders among animals and significant economic losses to the meat and milk supplychain. The purpose of this study was therefore to evaluate and diagnose the species and strains of Brucella isolates among cattles via multiplex polymerase chain reaction. Materials and Methods: In this study, blood samples were taken from 22 cows diagnosed as having brucellosis by PCR test. Blood samples were cultured in BACTEC vials and incubated at 37 degrees Celsius for 5 days following which each sample was cultured on Brucella agar and kept for 3 days under Co2 condition.The 16SrRNA gene was used as the target for the detection of Brucella genus and the bcsp31 gene was used for the detection of Brucella biovars. The PCR products were electrophoresed on %1 agarose and compared with standard strains. Results: The PCR results showed a total of 22 positive samples for Brucella among cattles. Out of the 22 cattle positive samples, 19 were identified as B.abortus (biovars 1, 2, 3, 4, 5) and 3 as B. melitensis (biovars 1, 2, 3). Conclusions: Brucella abortus biovars 1 and 3 and B .melitensis biovar 1 are the most prevalent biovars among cattles in Lorestan province, Iran. Moreover, multiplex PCR method could be used to improve the qualitative level and the Brucella diagnosis speed in laboratories.