بررسي موتاسيون در ژن gyrA در سويه هاي باليني اشريشيا كلي و كلبسيلا پنومونيه جدا شده ازبيمارستان امام خميني (ره) شهرستان ساري

Evaluating the gyrA Gene Mutation in Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae Isolates in Sari Imam Khomeini Hospital, Iran

سابقه و هدف: افزايش تعداد مقاومت به كوئينولون ها در باكتري هاي اشرشيا كلي و كلبسيلا پنومونيه هاي جدا شده از ساري، مشكلات فراواني را در درمـان ايجـاد نموده است. موتاسيون در ژن gyrA منجر به تغيير اسيدهاي آمينه و مقاومت به فلئوروكينولون ها در باكتري هاي اشرشياكلي و كلبسيلا پنومونيه مي باشد. هدف ما از اين مطالعه، تشخيص جهش هاي قابل توجه از ايزوله هاي جدا شده به روش SSCP PCR مي باشد. مواد و روش ها: ايزوله هاي جدا شده جمع آوري و تست حساسيت آنتي بيوتيكي )سيپروفلوكساسين، ناليديكسيك اسيد) معمول به روش ديسك ديفيوژن آگار انجام شد. مقاومت فلوروكينولون با استفاده از آزمون MIC به روش E-test تاييد شد. از روش SSCP PCR براي تشخيص جهش در ژن ser83-asp87) gyrA( استفاده شد. نتايج به دست آمده از روش SSCP PCR براي تاييد به طور راندوم، تعيين توالي گرديد. يافته ها: از 103 ايزوله جدا شده، 65 نمونه (63/2 درصد) اشرشياكلي و 38 نمونه (36/8 درصد) كلبسيلا پنومونيه بودند. ايزوله هاي جدا شده با روش SSCP PCR بررسي شدند. در همه ي نمونه هاي اشرشياكلي مقاوم به سيپروفلوكساسين، حداقل يك موتاسيون مشاهده گرديد. هم چنين در همه نمونه هاي كلبسيلاي مقاوم به سيپروفلوكساسين، حداقل يك موتاسيون و در 14 نمونه در هر 2 نقطه موتاسيون مشاهده گرديد، در حالي كه در 5 نمونه حساس به سيپروفلوكساسين هيچ موتاسيوني ديده نشد. استنتاج: نتايج نشان داد كه جهش در gyrA ارتباط نزديكي با مقاومت كينولون ها دارد. افزايش شيوع مقاومت كينولون ها در ميان باكتري E.coli و K.penumune جدا شده، نشان دهنده نياز به برنامه هاي كنترل عفونت مي باشد.

Background and purpose: Increasing resistance to Quinolones in Escherichia coli and Klebsiella pneumonia in Sari, has caused many problems in treatment. Mutation in gyrA gene lead to changes in amino acids and resistance against Fluoroquinolones in E. coli and K. pneumonia. This study aimed at identifying remarkable mutations in E. coli and K. pneumonia isolates using PCR-SSCP analysis. Materials and methods: Antibiotic sensitivity test (ciprofloxacin, nalidixic acid) was performed using Agar Disk Diffusion method. Resistance to fluoroquinolones was confirmed by E-test. (MIC experiment). We used PCR-SSCP method to detect mutation in gyrA (ser83 – asp 87) genes. Then, the PCR products were randomly sequenced. Results: From 103 isolates, 65 (63.2 %) were E. coli and 38 (36.8%) were K. pneumoniae. In all E.coli isolates resistant to Ciprofloxacin, at least one mutation was observed. Also, in all K. pneumoniae samples resistant to Ciprofloxacin, at least one mutation was seen and in 14 samples two mutation points were observed, but in 5 samples that were sensitive to Ciprofloxacin no mutation was observed. Conclusion: This study showed that the mutation in gyrA genes is closely related to quinolones resistance. High prevalence of quinolones resistance in E. coli and K. pneumoniae isolates requires more appropriate infection control programs