شناسايي مورفولوژيك و مولكولي آسپرژيلوس‌ هاي جدا شده از بيماران بر اساس تعيين توالي ژن بتا توبولين (β-tubulin)

Identification of morphological and molecular Aspergillus species isolated from patients based on beta-tubulin gene sequencing

گونه هاي آسپرژيلوس عامل پاتوژن فرصت طلب در افراد داراي ضعف سيستم ايمني مي باشند. اين قارچ ها از جنبه هاي مختلف بيماريزايي و توكسين زايي حائز اهميت هستند. هدف مطالعه حاضر، ارزيابي ژن بتاتوبولين در تشخيص و تعيين گونه هاي باليني آسپرژيلوس به روش تعيين توالي، در مقايسه با خصوصيات مورفولوژيك (مانند شكل كونيدي ها در آزمايش مستقيم، شكل كلني در كشت و تست هاي فيزيولوژيك) مي باشد.مواد و روش ها: در اين مطالعه 465 بيمار مراجعه كننده به آزمايشگاه شفاي اصفهان، مورد بررسي قرار گرفتند. شناسايي مورفولوژيك و مولكولي نمونه هاي باليني، به ترتيب با استفاده از كشت بر روي محيط هاي سابورو آگار، مالت اكستركت آگار و چاپكس آگار، مشاهده ميكروسكوپي نمونه ها و تقويت ژن بتا توبولين و تعيين توالي ناحيه مذكور انجام گرديد. سكانس ها از طريق مقايسه با اطلاعات موجود در بانك ژني آناليز شدند. يافته ها: از 465 مراجعه كننده مشكوك، 39 مورد بيمار (8%) شناسايي شد. بيشترين جدايه ها مربوط به گونه فلاووس (56%)، اوريزآ (20%) و فوميگاتوس (10%) بودند. 59% بيماران زن و 41% مرد بودند.بحث و نتيجه گيري: در مقايسه با تست هاي فنوتيپيك، تعيين توالي ژن بتا توبولين براي شناسايي جدايه هاي باليني آسپرژيلوس در سطح گونه بسيار با ارزش است. جايگزيني روش هاي مولكولي با روش هاي فنوتيپيك و تشخيص دقيق ميكروارگانيسم به منظور درمان موثر به محققان اين عرصه توصيه مي گردد.

Background: Aspergillus species are opportunistic pathogens among immunocompromised patients. In terms of pathogenesis and mycotoxin production، they are in great value. The aim of the this study was to evaluate of beta-tubulin gene for identification of clinical Aspergillus species by PCR-sequencing method compared to morphological features of clinical isolates (such as conidial shape in direct microscopic examination، colony shape in culture، and physiological tests). Materials and Methods: In this study، 465 patients referred to the Shefa laboratory of Isfahan were evaluated. Morphological and molecular identification of clinical samples were performed using culture on sabouraud agar، malt extract agar، czapekdox agar، direct microscopy، and PCR-sequencing of beta tubulin gene، respectively. Sequences were analyzed in comparison with gene bank data. Results: Thirty nine out of 465 suspected cases (8.4%) had aspergillosis. The most prevalent species were Aspergillus flavus (56.4%)، A. oryzae (20.5%)، and A. fumigatus (10.2%)، respectively. Fifty nine percent of patients were females and 49% were males. Conclusion: In comparison with phenotypic tests، sequencing of beta-tubulin gene for identification of Aspergillus species is at great value. Replacement of molecular techniques with conventional tests is recommended for precise identification of microorganism for better management of infection.