توليد رده سلولي پايدار از سلول هاي پي 19 توليد كننده PTS2-EGFP

Creation of a Stable P19 Cell Line Producing PTS2-EGFP

سلول هاي P19 سلول هاي كارسينوماهاي جنيني موشي هستند كه از نظر تكويني پرتوان بوده، همانند سلول هاي جنيني طبيعي قادر به تمايز هستند. برخي خصوصيات سلول هاي P19، آن ها را براي بررسي وقايع اوليه تكوين ارزشمند مي سازد. روش ها: وكتور بياني pUcD2.hygro.PTS2-EGFP به سلول هاي P19 ترانسفكت گرديد؛ سپس با استفاده از آنتي بيوتيك هيگروميسين كلوني هاي سلولي رشد يافته مقاوم به آنتي بيوتيك انتخاب شده، با روش هاي مختلف خصوصيات سلولي آن ها بررسي گرديد. يافته ها: بررسي هاي RT-PCR نمايانگر بيان ژن EGFP در اين سلول ها است و مطالعات ايمونوسيتوشيمي نيز مويد حفظ حالت پرتواني سلول هاي ترانسفكت شده مي باشد. نتيجه گيري: از آن جايي كه سلول هاي P19 قادرند به راحتي به سلول هاي مختلف تمايز يابند، با استفاده از اين رده سلولي، تغييرات ايجاد شده در پراكسي زوم ها در حين تمايز اين رده سلولي قابل ارزيابي است

Background: P19 cells are mouse embryonic carcinoma cells which contain pluripotent ability, like stem cells, to differentiate into different cell lines. There are several properties for this cell line that make it a valuable cell model for study of developmental stages. Methods: At the first step, PTS2-EGFP coding sequence which was cloned in pUcD2.hygro vector was used for transfection in to P19 cells. As the plasmid contained hygromycin (Hygror) resistance gene, stable cells were selected using hygromycin as an antibiotic. Stable transformed cells were characterized by RT-PCR and immunostaining analyses. Findings: RT-PCR results indicated EGFP was expressed in these cells. Moreover immunocytochemical analysis of the cells confirmed the preserved pluripotency states of transfected cells. Conclusion: As P19 Cells are able to differentiate into several cell lines, using this stable cell line we will able to chase the molecular kinetics of peroxisomes.