بررسي بيان ژن هاي مربوط به زير گروه هاي A2B و A2A گيرنده هاي آدنوزين در نمونه بافت سرطان پستان انسان

Expression of A2A and A2B Adenosine Receptors in Human Breast Tumors

آدنوزين از طريق چهار زير گروه مختلف گيرنده آدنوزين (A1، A2A، A2B وA3 ) نقش مهمي در تنظيم رشد، تكثير و مرگ سلول هاي طبيعي و سرطاني دارد. دانستن الگوي بيان زير گروه هاي مختلف گيرنده هاي آدنوزين در بافت توموري و تفاوت آن با بافت طبيعي براي گسترش اهداف درماني جهت كنترل موثرتر رشد تومور ضروري مي باشد. روش ها: نمونه هاي جمع آوري شده شامل 11 نمونه سرطاني و 4 نمونه طبيعي بود كه طبيعي يا پاتوژن بودن تمام نمونه ها از نظر پاتولوژيكي تاييد گرديد. با استفاده از روش Real-Time PCR، ابتدا RNA سلول ها جدا شد و به تواليcDNA ، رونويسي معكوس گرديد. براي هر دو زير گروه و بتا اكتين (شاهد مثبت)، با استفاده از توالي هاي cDNA مربوطه، يك جفت پرايمر اختصاصي طراحي و سنتز شد. PCR در شرايط مطلوب براي هر زير گروه انجام گرديد. محصولات PCR، روي ژل آگارز با غلظت 1.7 درصد الكتروفورز گرديد. به وسيله روش هاي نيمه كمي با استفاده از نرم افزار Photoshop، Relative intensity نمونه ها اندازه گيري شد. يافته ها: از بعد كيفي در تمامي نمونه هاي طبيعي و سرطاني بيان هر دو گيرنده A2A و A2B مشاهده شد. به كمك آناليزهاي تصويري معلوم گرديد كه بيان گيرنده هاي A2B در بافت تومور 1.36 برابر بافت طبيعي است، ولي در مورد گيرنده هاي A2A تفاوت چنداني بين بيان آن ها در بافت توموري و بافت طبيعي مشاهده نشد. نتيجه گيري: مطالعات نيمه كمي انجام شده در اين تحقيق، به اهميت زير گروه A2B در سرطان پستان انسان اشاره دارد. اميد است در آينده براي بررسي دقيق تر اين گيرنده ها به وسيله RT-PCR يا بررسي كمي به وسيله PCR به منظور شناسايي بهتر اين گيرنده ها اقدامات لازم عملي گردد.

Background: The expression profile, signal transduction, molecular function and cell growth modulation of adenosine receptor subtypes in the human breast cancer cell lines are described; we decided to investigate the possible roles of adenosine receptors in the human breast tissues. In this study, we used RT-PCR to assess A2A and A2B gene expression in normal and tumoral breast tissues. Methods: Breast tumors and non-neoplastic mammary tissues (n = 15) were collected immediately after mastectomy and stored at -80°C until use. All tumors were histologically confirmed to be breast cancer. Total RNA was extracted and reverse transcribed to cDNA. PCR primers were synthesized from human adenosine receptor cDNA sequences. PCR was performed under optimized condition for each receptor subtype. Amplification of beta-actin mRNA served as control for RT-PCR. The PCR products were separated on 1.5% agarose gels. Finding: To elucidate the expression of A2A and A2B mRNA in breast carcinoma and normal tissues, we compared the level of A2A and A2B mRNA expression by RT-PCR analysis. All breast tumor and normal tissue specimens expressed A2A and A2B adenosine receptor transcripts. We observed that expression of A2B in tumor tissues is 1.36 fold of normal tissues but there was no difference between the expressions of A2A in tumor and normal tissues of the breast, when normalized against that of betaactin. Conclusion: These results indicated for the first time, to our knowledge, the expression profile of A2A and A2B adenosine receptors in the human breast carcinoma. The present study showed that a high A2B gene expression level was found in breast tumor tissues in comparison with the normal tissues. However, further studies based on the Real-time quantitative RT-PCR are needed to confirm gene expression levels.