طراحي و ساخت سازه ي e2-flic با استفاده از ژن flic باكتري سالمونلا انتريكا و ژن e2 ويروس هپاتيت c و بيان آن در سيستم يوكاريوتي

Design and Construction of E2-fliC Construct Using fliC Gene from Salmonella Enterica and E2 Gene from Hepatitis C Virus and its Expression in Eukaryotic System

امروزه يكي از راهكارهاي طراحي واكسن، تهيه فيوژن پروتئينهاي حاصل از عوامل ايمونوژن عامل عفوني با پروتئين ادجوانت مي باشد. مطالعه ي حاضر براي طراحي و ساخت سازه ي e2flic به عنوان كانديد واكسن با استفاده از ژن flic باكتري سالمونلا انتريكا و ژن e2 ويروس هپاتيت c و بيان آن در سيستم يوكاريوتي اجرا گرديد.روش بررسي: در اين مطالعه كه به صورت يك تحقيق بنياديكاربردي است، براي ساخت سازه ي e2-flic، دو قطعه ي e2 و flic از پلاسميدهاي pbluescript-e2 و pbluescript-flic به روش pcr تكثير شدند. براي تهيه پلاسميد نوتركيب pcdnae2flic، ابتدا پلاسميد (+)pcdna3.1 از سلولهاي dh5 α استخراج و قطعه ي e2 در آن الحاق گرديد. با تهيه پلاسميد نوتركيب pcdna3.1-e2، در مرحله بعد الحاق قطعه ي flic در آن انجام شد. براي ارزيابي بيان سازه ي e2flic، سازه در پلاسميد pegfp-n3 الحاق گرديد و ترانسفكشن پلاسميد نوتركيب pegfpn3-e2-flic به سلولهاي cos7 انجام شد تا بيان پروتئين در زير ميكروسكوپ فلورسنت با مشاهده ي نور سبز ارزيابي شود.يافته ها: ظهور نور فلورسان سبز در سلولهاي مورد مطالعه توسط ميكروسكوپ فلورسنت، بيشترين بيان از ساختار e2-flic را 48 ساعت پس از ترانسفكشن نشان داد. به علاوه تهيه پلاسميد نوتركيب pcdna-e2-flic با روش pcr، برش آنزيمي و توالي يابي تاييد شد.نتيجه گيري: يافته هاي ما پيشنهاد مي كنند كه فيوژن پروتئين e2-flic به طور موثري بيان شده و ممكن است از لحاظ آنتي ژنيسيته بتواند همانند پروتئين e2 ويروس آلوده كننده، پس از ايميونيزاسيون موش ها با pcdnae2-flic به عنوان كانديد واكسن در تحريك سيستم ايمني عمل كند.

Background and Aim: At the present time one of the strategies in vaccine design is generation of fusion proteins containing (including) immunogen of infectious agents and adjuvants. In this study design and construction of E2-fliC fragment as a vaccine candid was conducted by using fliC gene from Salmonella enterica and E2 gene from hepatitis C virus. Materials and Methods: To prepare the E2-fliC construct, E2 and fliC fragments were first amplified from pBluscript-E2 and pBluscript-fliC, respectively by PCR method. To generate pcDNA-E2-fliC plasmid, E2 was subcloned into plasmid pcDNA3.1 (+) which was extracted from DH5α cells. The fliC sequence was then cloned into the pcDNA3.1-E2. To evaluate the expression of E2-fliC construct, it was inserted into the pEGFP-N3 expression vector. Then COS-7 cells were transfected with pEGFPN3- E2-fliC to evaluate the expression of the fusion protein by observation of the EGFP signal under the fluorescence microscope. Results: By development of GFP fluorescent using fluorescence microscopy the most expression of E2-fliC construct was observed at 24h after transfection. The accuracy of the recombinant plasmid pcDNA-E2-fliC was confirmed by PCR, restriction enzymes and DNA sequencing. Conclusion: Our findings suggest that E2-FliC fusion protein has expressed efficiently and most likely similar to HCV E2 protein induces immune system of mice after their immunization with pcDNA-E2-fliC.