بررسي فلوسايتومتري كايمريسم گلبول‌هاي قرمز پس از پيوند مغز استخوان

Flow cytometric survey of RBC chimerism after bone marrow transplantation

سابقه و هدف اين مطالعه به ‌ منظور بررسي بروزكايمريسم گلبول‌هاي قرمز پس از پيوند مغزاستخوان به روش فلوسايتومتري انجام شده است. مواد و روش ‌ ها نوع مطالعه مقطعي بوده و براي انجام اين مطالعه از آنتي بادي هاي ضد گروه ‌ هاي خوني ABH ,Rh, Kell, Duffy, Kidd, MNS كه با ماده فلورسانس FITC نشان دار شده‌اند استفاده گرديد. 14 بيمار مبتلا به بدخيمي‌هاي هماتولوژيك كه تحت پيوند مغز استخوان قرار گرفته بود ند ، جهت جمعيت مورد مطالعه انتخاب شدند. نمونه مورد نياز 5 ميلي ليتر خون محيطي (در لوله حاوي EDTA ) بود. ابتدا فنوتيپ گلبول‌هاي قرمز دهندگان و گيرندگان پيوند با هر دو روش آگلوتيناسيون و فلوسايتومتري تعيين و سپس در روزهاي 15، 30 و 60 پس از پيوند ، فقط نمونه خون محيطي گيرنده از لحاظ آنتي ‌ ژن ‌ هايي كه بين دهنده و گيرنده متفاوت بودند توسط فلوسايتومتري مورد بررسي قرار گرفت. آزمايش جستجوي آنتي بادي و سنجش تيتر ايزوهم آگلوتينين در نمونه پلاسماي بيماران قبل از پيوند وروز 60 پس از پيوند انجام شد . يافته ها نتايج اين مطالعه نشان دادند كه كايمريسم گلبول‌هاي قرمز پس از پيوند در تمام بيماران مورد بررسي (در 9 نفراز بيماران در روز 15 و 5 نفر در روز 30 پس از پيوند ) قابل مشاهده است . در پلاسماي هيچ ‌ يك از 14 بيمار مورد بررسي قبل و پس از پيوند ، هيچ نوع آنتي بادي عليه گروه ‌ هاي فرعي و Rh شناسا يي نگرديد. ناسازگاري ABO بين دهنده و گيرنده مانع وقوع كايمريسم نشده اما در بيماراني كه با دهنده خود ناسازگاري ABO داشته‌اند ، تيتر ايزوهم آگلوتينين ‌ هاي ABH پس از پيوند كاهش نشان داده است . اگر چه حضور ايزوهم آگلوتينين ‌ هاي ABH مانع از وقوع كايمريسم نشده ولي ظاهراً با اتصال به آنتي ‌ ژن ‌ هاي مربوطه در غشاء گلبول‌هاي قرمز كايمريك ، مانع رد يابي آنتي ژن شده است و وقوع كايمريسم از طريق پايش ساير آنتي ‌ ژن ‌ ها تأييد شد. بروز GVHD و مصرف داروي فلودارابين باعث تاخير در بروز كايمريسم نشده است. نتيجه‌گيري بررسي فنوتيپ گلبول‌هاي قرمز فرد اهدا كننده مغز استخوان در خون محيطي گيرنده پيوند با روش فلوسايتومتري ا مكا ن ‌پذير است و با شناسا يي فنوتيپ گلبول‌هاي قرمز در جمعيت ‌ هاي مخلوط ، بررسي رتيكولوسيت ‌ ها در آتيه نيز ممكن شد ه و به اين ترتيب بررسي كايمريسم درافرادي كه اخيراً خون دريافت كرده‌اند نيز مقدور مي ‌ باشد .هم چنين با ادامه ارزيابي كايمريسم گلبول‌هاي قرمز درصورت حصول به كايمريسم كامل و شناسا يي گلبول‌هاي قرمز گيرنده ، مي ‌توان عود بيماري را پيشگو يي نمود.

Background and Objectives The aim of the present study was to evaluate red blood cell chimerism after bone marrow transplantation by flow cytometry. Materials and Methods In order to perform this assay, FITC labeled antibodies against blood groups ABH, Rh, Kell, Duffy, Kidd, MNS were used.14 hematologic patients under BMT were selected for this study. The required sample was 5 ml peripheral blood that is collected in tubes containing EDTA. At first, donor and recipients red cells phenotypes were identified with the use of both agglutination and flow cytometry methods; then, on post-transplantation days of 15, 30 and 60, only blood samples of the recipients were analyzed by flow cytometry for the antigens differing from donors to recipients. Antibody screening test and titration of ABH Isohemagglutinins were performed on recipients' plasma samples and then repeated on posttransplantation day of 60. Results After BMT, red cell chimerism was detected in all 14 patients (in 9 patients on posttransplantation day of 15 and in 5 patients on day of 30). Antibodies against minor blood groups and Rh blood group were not detected at all. The occurrence of chimerism was not inhibited by ABO incompatibility of donors and recipients but in patients who were ABH incompatible with their donors, ABH isohemagglutinins titer following transplantation decreased. Although the presence of isohemagglutinins did not prevent chimerism but it seems these antibodies by attaching to their related antigens on chimeric red cells membrane prevented corresponding antigen detection. Conclusions Now by using flow cytometry, red cell phenotyping is applicable and reticulocyte analysis is much easier to perform so that chimerism can be detected in patients who have recently experienced blood transfusion. Moreover, through further evaluation of red cell chimerism and detection of recipient autologous red cells, disease relapse can be predicted.