بررسي فراواني آنتي‌ژن‌هاي سازگاري بافتي اصلي يك و دو (HLA-I,II) در قوم بومي همدان و مقايسه روش مولكولي و سرولوژيك در آنتي‌ژن‌هاي كلاس دو (لكوس DR)

HLA-Class I and II frequencies in ethnic Hamedani people, and the comparison of serological and molecular (PCR) methods for HLA-Class II

سابقه و هدف ‌ هدف از اين مطالعه تعيين فراواني آنتي‌ژن‌هاي HLA در جمعيت بومي شهر همدان مي‌باشد كه علاوه بر استفاده در مطالعات مردم‌شناسي و بيماري‌هاي مرتبط با HLA ، كاربرد وسيعي در بانك پيوند اعضا دارد. به‌منظور راه‌اندازي روش DNA-based HLA Typing در سازمان انتقال خون تهران، با انجام آزمون PCR به روش SSP ، مقايسه‌اي بين دو روش مولكولي و سرولوژيك انجام شد. مواد وروش‌ها مطالعه انجام شده توصيفي مي‌باشد و جامعه مورد مطالعه تمام افراد بومي شهر همدان درنظر گرفته شده است. از 100 نفر به‌روش تصادفي نمونه‌گيري انجام شد و افراد موردنظر از بين اهداكنندگان سازمان انتقال خون شهر همدان و از طريق پرسشنامه برگزيده شدند. به‌منظور تعيين آنتي‌ژن‌هاي HLA كلاس يك و دو و انجام آزمون PCR ، به ترتيب 10 ميلي‌ليتر خون هپارينه و 3 ميلي‌ليتر خون حاوي EDTA جمع‌آوري شد و نمونه‌هاي PCR بلافاصله فريز شدند. جداسازي لنفوسيت‌هاي B و T به روش Nylon Wool adherence صورت گرفت. در اين مطالعه از روش آمار توصيفي (فراواني، درصد) و براي مقايسه نتايج حاصل از دو روش سرولوژيك و مولكولي از آزمون كاي‌دو (Chi-square) استفاده شد. يافته‌ها فراواني آنتي‌ژن‌هاي HLA كلاس يك و دو در 100 فرد مورد مطالعه به ترتيب زير به‌دست آمد؛ در گروه آنتي‌ژن‌هاي كلاس يك لكوس A : A25 و HLA-A29 كمترين فراواني (2%)، HLA-A9 بيشترين فراواني (21%) را داشتند. درلكوس B : كمترين فراواني براي (HLA-B16 (1% و بيشترين فراواني براي (HLA-B51 (33% گزارش شد. در لكوس C : كمترين فراواني براي (HLA-CW5 (3% و بيشترين فراواني براي HLA-CW4 (33% به‌دست آمد. در گروه آنتي‌ژن‌هاي كلاس دو، لكوس DR : كمترين فراواني مربوط به (HLA-DR8 (3% و بيشترين فراواني مربوط به (HLA-DR11 (47% گزارش شد. نتيجه گيري در نتايج مقايسه‌اي بر روي 40 نمونه به‌علت اين‌كه كيت مصرفي Biotest DRB/SSP داراي سطح تفكيك پاييني بود، اختلاف معني‌داري بين نتايج به‌دست آمده از دو روش در آنتي‌ژن‌هاي كلاس دو لكوس DR ديده نشد، البته با اين حال به علت نداشتن محدوديت‌هاي موجود در روش سرولوژيك، استفاده از اين روش ترجيح داده مي‌شود. مي‌توان درمرحله بعدي براي تفكيك برخي ازآنتي‌ژن‌ها درمواردي نظير واكنش متقاطع وسطح تفكيك بيشتر آللي، ازسطوح تفكيك بالاتراستفاده نمود. مشخص بودن فراواني آنتي‌ژن‌هاي HLA در اقوام مختلف در مطالعات مردم‌شناسي، مهاجرت‌هاي هر جمعيت و نيز يافتن اهداكننده سازگار در مراكز مغز استخوان لازم است و استفاده از روش‌هاي مولكولي با سطح تفكيك متوسط يا بالا در مراكز اهداي مغزاستخوان موجب تعيين دقيق‌تر و كاهش سازگاري بين دهنده و گيرنده پيوند و در نتيجه بهتر شدن عواقب كلينيكي پيوند خواهد شد.

Background and Objectives In this study our aim was to determine HLA-Class I and II antigens freguencies of Hamedani ethnic group. In addition to demographic studies and disease association, it has wide application in bone marrow donor registeries. Materials and Methods In order to establish DNA-based HLA typing in central Laboratory of Iranian Blood Transfusion Organization, a comparison of serological and molecular (sequence specific primers “SSP”) methods for HLA-DRB has been performed. The study was descriptive and the population under study were selected out of the native people of Hamedan; 100 healthy volunteer blood donors were chosen by questionnaire. 10ml heparinized and 3ml EDTA blood were collected from each selected donor. EDTA (PCR) samples were then frozen. Results N.I.H standard microlymphocytotoxicity and Nylon wool T and B cells separation was used for serological I and II typing. HLA-Class I plates were prepared from Iranian Blood Fractionation and Research Company and for Class II we used Biotest DR/DQ Typing Trays. PCR was done using “Roche high pure DNA extraction” Kit and HLA-DRBSSP (Biotest). The most and least frequent HLA-B antigens were B5 group (B51/B52) and B16 (38,39) respectively. Because of low resolution of HLA-DRB Kit, no significant difference was observed between serological and PCR methods. Although some blanks have been determined by PCR. Conclusions The HLA-DRB determination by PCR is mandatory for donor/recipient pairs (even sibling) for bone marrow transplantation; for donors it should be done by high resolution kits.