ساخت ه‍ِم كنترل براي الكتروفورز استات سلولز

Preparation of heme control for cellulose acetate electrophoresis

جهت پيشگيري از بروز خطا در تعيين هموگلوبينوپاتي‌ها به‌روش الكتروفورز بر روي استات سلولز، به‌كاربردن نمونه خون كنترلي حاوي هموگلوبين‌هاي F ، A ، S و يا C در كنار نمونه‌هاي بيماران الزامي است. زيرا عدم استفاده از هِم كنترل موجب تفسيرهاي نادرست مي‌گردد كه بيانگر ضعف در سيستم كنترل كيفي آزمايشگاه است. هدف از اين طرح تحقيقاتي ساخت هِم كنترل براي الكتروفورز استات سلولز بود. مواد وروش‌ها مطالعه انجام شده تجربي (exprimental) و روش نمونه‌گيري انتخابي بود . ابتدا از بين نمونه هاي خون بيماران، آنهايي‌كه داراي هموگلوبين غير طبيعي بودند انتخاب وپس از ليز گلبول‌هاي قرمز و سانتريفوژهموليزيت بادور 2 5 000 در دقيقه ، لايه رويي، حاوي هموليزيت شفاف بامحلول درابكين طوري رقيق گرديد كه غلظت هموگلوبين به 20 تا30 گرم در ليتر رسيد وهموگلوبين به سيانومت هموگلوبين تبديل گرديد . آنگاه پس از افزودن ساكاروز ومواد محافظ، هِم كنترل ازصافي ميلي پور( µm 0/45) عبور داده شد . سپس در ويال‌هاي كوچك تقسيم وليوفيليزه گرديد. محاسبات آماري به كمك نرم‌افزار آماري SPSS انجام شد. يافته‌ها دراين تحقيق سه نمونه هِم كنترل تهيه گرديد . نمونه شماره يك حاوي هموگلوبين‌هاي D,F,A يا G ، نمونه شماره دوحاوي هموگلوبين‌هاي S,A ونمونه شماره سه حاوي هموگلوبين‌هاي F,A بود. مقدارسيانور پتاسيم به‌كاررفته 10 مرتبه كمتر از ساير روش‌هاي ساخت بود. هِم كنترل تابيش از شش ماه پايداري داشت و انواع هموگلوبين به وضوح از يكديگر جدا مي‌شدند. محاسبه ضريب پراكندگي (CV) و انحراف معيار (SD) نشان داد كه روش ساخت از قابليت تكرارپذيري خوبي برخوردار است. نتيجه گيري بنابراين روش ساخت پيشنهادي كه براساس تجربه علمي و عملي انجام شده و در اين طرح انتخاب گرديده ، با مقايسه باساير روش‌ها در حالي‌كه از پايداري و قابليت تكرارپذيري خوبي برخوردار است داراي مراحل ساخت كمتري است، مقرون به صرفه است و به‌علت مصرف كم سيانور پتاسيم داراي ايمني بيشتري براي كاركنان آزمايشگاهي مي باشد .

Background and Objectives To avoid laboratory errors in the detection of hemoglobinopathies, a control sample containing hemoglobin (Hb) A,F,S or C should run with each set of samples.The aim of this project was to prepare a lyophilized heme control for the cellulose acetate electrophoresis. Materials and Methods After lysing the red blood cells, the hemolysate was centrifuged at 25000 rpm. The clear red supernatant was diluted with drabkin reagent to 20-30 gr/L and Hb was converted to cyanomethemoglobin. After adding sucrose and preservatives, the hemolysate was passed through milipore filter (0.45 μm) and then aliqouted and lyophilized. Results In this project three heme control samples were prepared. The first sample contains Hbs A,F,D or G ,the second one contains Hbs A,S, and the third contains Hb A,F. Although the amount of potassium cyanide used is 10 times less than other methods , the stability is more than 6 months at 4oC; moreover, and the electrophoretic patterns have good resolution and the obtained CV and SD show good reproducibility. Conclusions The preparation method in this project is simple, reliable, cost effective and in comparison with other methods has less amount of potassium cyanide; therefore, it is safe for the laboratory staff.