تأثير سنتز نانوليپوزوم پگيله حاوي DNAi در كاهش بيان ژن BCL-2 رده سلولي DLCL2

The Effect of Synthesis of Pegylated Nanoliposome Containing DNAi on Reduction of BCL-2 Gene Expression in DLCL2 Cell Line

زمينه و هدف: لنفوم غيرهوچكين از بيماري‌هاي شايع با منشأ سلول‌هاي لنفاوي مي‌باشد. اين مطالعه با هدف بررسي ميزان اثرگذاري نانوليپوزوم‌هاي پگيله حاوي DNAi (داروي آنتي‌سنس) بر كاهش ميزان بيان ژن BCL-2 انجام شد. روش بررسي: در اين مطالعه، براي تهيه نانوليپوزوم پگيله حاوي DNAi، سه فرمولاسيون با تركيب‌هاي 5، 10 و 15% ازPEG 2000 و نسبت‌هاي مشخصي از فسفوليپيدها و كلسترول تهيه شد. پس از خالص‌سازي با استفاده از دستگاه زتاسايزر، ميانگين قطر نانوليپوزوم محاسبه گرديد. بازده دربرگيري دارو براساس منحني استاندارد دارو تعيين شد. اثر سايتوتوكسيسيتي محصول در اثر تيمار با غلظت‌هاي 0/2، 0/5 و 0/8 ميكروگرم برميكروليتر از هركدام فرمولاسيون‌ها به‌صورت سه بار تكرار در محيط in vitro با روش MTT ارزيابي شد، سپس بيان ژن BCL-2 در رده سلولي DLCL2 بررسي گرديد. داده‌ها با استفاده از آناليز واريانس يك‌طرفه تحليل شدند. يافته‌ها: ميانگين قطر نانوليپوزوم پگيله حاوي DNAi، 117 نانومتر تخمين زده شد و بازده دربرگيري دارو، 67% بود. نتايج حاصل از تست MTT بر روي رده سلولي DLCL2 نشان داد بيشترين ميزان مهار رشد سلولي مربوط به تيمار با نانوليپوزوم‌هاي پگيله 10% و غلظت 0/5 ميكروگرم برميكروليتر بوده است. همچنين كاهش معني‌داري در بيان ژن BCL-2 در رده سلولي DLCL2 تيمارشده با نانوليپوزوم‌هاي پگيله 10% در تمامي غلظت‌ها در 48 ساعت مشاهده گرديد، كه بيشترين كاهش بيان ژن در غلظت 0/5 ميكروگرم برميكروليتر بود. نتيجه‌گيري: فرمولاسيون نانوليپوزوم پگيله 10%، كارايي بالاتري جهت حفظ و رهايش دارو نسبت به دو ليپوزوم ديگر سنتزشده دارد. به‌نظر مي‌رسد نانوليپوزوم سنتز شده، پتانسيل استفاده در صنايع داروسازي دارد.

Background and Objectives: Non-Hodgkin lymphoma is one of the common cancers that originates from lymphatic cells. The objective of this study was to assess the effectiveness of the DNAi containing pegylated nanoliposome (antisense drug) on decrease of BCL-2 gene expression. Methods: In this study, to prepare DNAi containing pegylated nanoliposome, 3 formulations were prepared with 5, 10, and 15% combinations of PEG 2000 with certain ratios of phospholipid and cholesterols. After purification by a Zetasizer, the mean diameter of nanoliposome was measured. Drug efficacy was determined based on the standard curve of the drug. Cytotoxicity effect of the product was determined by treatment with 0.2, 0.5, and 0.8μg/μl concentrations of each formulation in triplicate in vitro using MTT method. Then, BCL-2 gene expression was analyzed in DLCL2 cell line. Data were analyzed using one way ANOVA. Results: The mean diameter of the DNAi containing pegylated nanoliposome was estimated to be 117 nm. The mean efficacy of the drug was 67%. The MTT assay on DLCL2 cell line indicated that the highest amount of cell growth inhibition was observed in treatment with pegylated nanoliposomes 10% (PEG10) and the concentration of 0.5μg/μl. Also, BCL-2 gene expression was significantly decreased in DLCL2 cell line in all concentrations of PEG10 in 48 hours, and the lowest level of BCL-2 gene expression was observed in 0.5μg/μl concentration. Conclusion: PEG10 nanoliposome formulation has higher efficacy in drug preservation and release compared to other two synthesized liposomes. It seems that the synthesized nanoliposome has the potential for using in pharmaceutical industries.