ارزيابي روش‌هاي توليد آنتي بادي عليه گلبول‌هاي قرمز گوسفند جهت به كارگيري در سنجش فعاليت سيستم كمپلمان

Assessment of production methods of antibodies against sheep red blood cells for application in complement system

سابقه و هدف در ارزيابي فعاليت سيستم كمپلمان و پي‌بردن به نقصان احتمالي در عملكرد اين سيستم ، غالباً از روش CH50 استفاده مي‌شود . در اين روش گلبول‌هاي قرمز گوسفند با آنتي‌بادي اختصاصي پوشانيده شده و قابليت سيستم كمپلمان در تكميل ليز اين سلول‌ها ، مورد ارزيابي قرار مي‌گيرد . در اين مطالعه ، به‌دليل نياز به آنتي‌بادي اختصاصي گلبول‌هاي قرمز گوسفند (SRBC) براي انجام آزمايش CH50 ، اقدام به توليد آنتي بادي پلي كلونال ويژه SRBC در حيوان خرگوش گرديد و آنتي بادي‌هاي توليدشده آمبوسپتور به روش‌هاي مختلف مورد ارزيابي قرار گرفتند. مواد و روش‌ها اين مطالعه از نوع تجربي (experimental) بود . براي انجام اين پژوهش ، تزريق گلبول كامل گوسفند يا آنتي‌ژن‌هاي غشايي آن با چند الگوي متفاوت به حيوان خرگوش صورت گرفت . آنتي بادي به دست آمده ، با استفاده از سرم پولد نرمال به عنوان منبع كمپلمان فعال (مربوط به حداقل 15 نفر از اهدا كنندگان خون) در روش CH50 بررسي و در نهايت مقدار جذب نوري (OD) مربوط به ميزان ليزگلبول‌ها در روش‌هاي مختلف با يكديگر مقايسه شد. در نهايت آناليز داده‌ها و مقايسه ميانگين مقادير OD541 در آزمايش CH50 با استفاده از آزمون One-Sample) t) انجام گرفت . يافته‌ها تزريق گلبول كامل گوسفند به حيوان خرگوش به دفعات متعدد با هر يك از الگوهاي تزريقي و به طريق داخل صفاقي و يا وريدي ، منجر به تشكيل تيتـر مطلوبـي از آنتي بادي در اين حيوان شده، اما سبب مرگ زودهنگام آن‌ به علت شوك آنافيلاكتيك نيز مي‌گردد. در حالي كه استفاده از سلول‌هاي سونيكه شده و يا حرارت ديده در اين راستا ، منجر به توليد آنتي سرم هايـي مي گردد كه ضمن داشتن ويژگي مطلوب، بقاي حيوان‌هاي مورد نظر را تهديد نمي‌نمايد . نتيجه گيري توليد آنتي بادي پلي‌كلونال بر عليه SRBC با استفاده از روش‌هاي مختلف ، ميسر مي باشد . با اين حال اين مطالعه نشان مي‌دهد ، چنانچه آنتي‌ژن‌هاي غشايي گلبول قرمز با روش سونيكاسيون و يا آنتي ژن‌هاي مقاوم به حرارت گلبول قرمز (Forssman) با به كارگيري حرارت 103 درجه سانتي‌گراد به دست آمده و جهت تزريق‌ و مصون سازي حيوان مورد استفاده قرار گيرند ، مي‌توان بدون به مخاطره انداختن بقاي حيوان، اقدام به توليد آنتي سرم با تيتر مطلوب نمود.

Background and Objectives CH50 method is used for the evaluation of complement system. In this method, sheep red blood cells (SRBCs) are sensitized with specific antibodies. Then, the capability of the complement system in the completion of the hemolytic reaction is assessed. In this study because of need for anti-SRBC antibody in CH50 test, it was produced in rabbit. This antibody is called “Amboceptor”. Materials and Methods In order to perform this study, SRBCs or their membrane antigens were injected into rabbits with different methods. Produced antibodies were analyzed in CH50 method using human pooled sera (derived from at least 15 blood donors). Finally the optical densities (ODs) related to the lysis of SRBCs were compared. It is obvious that the amount of OD is correlated with the efficiency of the antibody. Results Intravenous or intraperitoneal injections of SRBCs repeatedly result in the formation of high titer antibodies, but the rapid death of the animals due to the anaphylactic shock occurs. While the usage of sonicated or heat-treated antigens of SRBCs in the immunization leads to the formation of antibodies with high specificity and titer; it does not threaten the life of the animals. Conclusions Production of anti-SRBC antibodies is applicable using different methods. This study shows that the use of the membrane or heat-stable antigens of SRBCs, which are prepared using sonication and heating (103ºC) respectively, has some advantages. These antigens are safe for rabbits and the titer of the antibody is high enough to be used in CH50 test.