تعيين نسبت زنجيره آلفا/بتا در افراد سالم(45-18 سال) با اندكس‌هاي خوني (MCV≥ 80 و 27≤MCH ) و درصد HbA2 طبيعي به روش كروماتوگرافي تعويض كاتيوني

Determination of / ratio in healthy individuals (18-45 years old) with normal hematological indices (MCV≥ 80, MCH≥ 27) and normal HbA2 by cation exchange chromatography

سابقه و هدف براي موفقيت بيشتر برنامه پيشگيري از تالاسمي، انجام آزمايش بيوسنتز زنجيره‌هاي گلوبين به عنوان يك آزمايش تكميلي در كنار تجزيه DNA ضروري مي‌باشد. با توجه به اهميت موضوع، هر آزمايشگاهي بايد دامنه مرجع اين آزمايش را متناسب با روش به كار گرفته جهت افتراق انواع سندرم‌هاي تالاسمي به دست آورد. روش بيوسنتز زنجيره‌هاي گلوبين روش نسبتاًَ مشكل ولي مرجع جهت مطالعه سندرم‌هاي تالاسمي مي‌باشد. هم‌چنين براي تعيين جهش‌هاي ساختماني زنجيره‌هاي گلوبين كاربرد دارد. هدف از اين مطالعه، راه‌اندازي روش بيوسنتز زنجيره‌هاي گلوبين و تعيين نسبت زنجيره‌هاي β/α در افراد سالم بود. مواد وروش‌ها مطالعه انجام شده از نوع تجربي بود. در اين مطالعه نسبت زنجيره‌هاي گلوبين در دو مرحله بر اساس روش كلگ ـ ودرال(تغيير شكل يافته) اندازه‌گيري گرديد. آناليز زنجيره‌هاي گلوبين بر روي 30 پرسنل آزمايشگاهي سالم و بستگان آن‌ها كه داراي درصد HbA2 و اندكس‌هاي خوني نرمال بودند صورت گرفت. در اين روش، نمونه غني از رتيكولوسيت با مخلوطي از اسيدهاي آمينه كه يكي از آن‌ها(لوسين) با مواد راديو ايزوتوپ نشان‌دار شده، انكوبه مي‌گردد. پس از شستشوي اضافه راديو اكتيويته و رسوب گلوبين، زنجيره‌هاي مختلف به وسيله كروماتوگرافي تعويض كاتيوني، از يكديگر جدا مي‌شوند. يافته‌ها در اين تحقيق نسبت زنجيره‌هاي β/α در همكاران سالم آزمايشگاهي بدون سابقه b تالاسمي در خانواده محاسبه گرديد. ميانگين نسبت زنجيره، 0/12 ± 1/045( SD 1 ± mean ) با دامنه 1/165 – 0/925 به دست آمد كه اين نسبت با نسبت به دست آمده توسط ساير محققان در دنيا هم‌خواني داشت. نتيجه گيري در هر برنامه غربالگري تالاسمي، مشكلات تشخيص به وجود مي‌آيد كه بدون آزمايش بيوسنتز زنجيره‌ها قابل حل نمي‌باشند. روش كلگ ـ ودرال در حالي كه از قابليت تكرارپذيري و قابليت اعتماد خوبي برخوردار است، بسيار طولاني مي‌باشد(4 روز كاري). امروزه از روش‌هاي ديگري مانند HPLC فاز معكوس نيز براي جداسازي زنجيره‌ها استفاده مي‌گردد. بنابراين هر آزمايشگاهي متناسب با روشي كه به كار مي‌برد بايد دامنه مرجع خود را تعيين نمايد.

Background and Objectives For a successful prevention program, globin chain synthesis, as a complementary test beside DNA analysis, is necessary. So, it is important that each laboratory establishes its own reference range for the classification of thalassemia syndromes by globin chain synthesis. Globin chain synthesis is a relatively complex test introduced in the study of thalassemia syndromes as a reference method. The technique is also useful for variant chain identification.This study aims to stablish the method of globin chain synthesis to determine / chain ratio in healthy individuals. Materials and Methods In this study globin chain analysis was performed on 30 healthy laboratory personnels with normal HbA2 and normal hematological indices. In this method a reticulocyte-rich sample is incubated with a mixture of amino acids, one of which (leucine) radioactively labelled. After washing the excess radioactivity and precipitating the globin, different chains are separated by cation exchange chromatography. Results The mean / ratio was 1.045 ± 0.12 (mean ± 1SD) in healthy subjects. Our findings were in agreement with those of the other investigators in the world. Conclusions In any screening program, diagnostic problems will arise that can not be solved without biosynthetic studies. The Clegg and Weatherall method has been proved to be very reliable and reproducible, but time-consuming (requiring four days). New methods like reverse phase HPLC are now available for chain separation. Therefore, according to the procedures each laboratory should determine its own reference range.