ايجاد گياه سيب زميني مقاوم به ويروس PVX با استفاده از مكانيسم RNA Silencing

Production of potato resistant plant to PVX using an RNA silencing mechanism

يكي از عوامل اصلي كاهش محصول سيب زميني ويروس ها هستند. ويروس X سيب زميني (Potato X Potexvirus:PVX) از مهمترين ويروس هاي اين گياه مي باشد و عمده ترين روش مبارزه با آن استفاده از ارقام مقاوم است. در اين تحقيق سعي شد با بهره گيري از تكنيك RNA silencing گياهان سيب زميني مقاوم به اين ويروس توليد شود. براي اينكار ابتدا با دو همسانه سازي متوالي يك سازه سنجاق سري براي انتهاي ژن P25 ويروس PVX در ناقل pFGC5941 تحت پيشبر CaMV 35S ساخته شد. پروتيين P25 نقش ممانعت از RNA Silencing را در ميزبان ويروس به عهده دارد. ناقل نوتركيب حاصل پس از تاييد، به آگروباكتريوم منتقل شده و قطعات برگ و ميانگره سيب زميني رقم آگريا به وسيله آگروباكتريوم سويه LBA4404 تراريزش شدند. پس از كالوس زايي، جوانه زني و ريشه زايي، گياهان تراريخته انتخاب و تكثير شدند. بررسي مولكولي با PCR روي DNA گياها، با RT-PCR روي RNA آنها وجود تراژن و بيان شدن آن را تاييد كرد. گياهان تراريخته تكثير شده و در گلخانه به روش مكانيكي با PVX تلقيح شدند. نتايج ELISA با آنتي بادي اختصاصي پروتيين پوششي PVX مقاومت دو لاين تراريخته را نشان داد. تاييد مولكولي اين دو لاين مقاوم سيب زميني به PVX با RT-PCR روي RNA گياهان به كمك آغازگرهاي ژن پروتيين پوششي ويروس انجام شد. نتيجه اين تحقيق منجر به توليد دو لاين مستقل سيب زميني مقاوم به PVX گرديد كه بررسي مقاومت و اين هماني آنها در شرايط مزرعه بايستي انجام پذيرد و ميني تيوبرهاي آنها جهت تكثير توليد شود.