انتقال ژن آنتيژن سطحي ويروس هپاتيت B به گياه توتون

Transformation of Hepatitis B Virus surface antigen (HBsAg) gene into Tobacco plants

يكي از شايع ترين آلودگي هاي ويروسي انساني در سراسر جهان آلودگي ويروس هپاتيت B است. موثرترين شيوه براي كنترل و درمان اين بيماري، تزريق واكسن مي باشد، اما با توجه به گران بودن داروهاي شيميايي، توليد پروتيين نوتركيب ويروس هپاتيت B به عنوان واكسن خوراكي در گياهان طي چند سال گذشته با بيورآكتورهاي مناسب براي توليد ارزان و فراوان اهميت يافته است. بنابراين در اين پژوهش سعي شده است كه ژن HBsAg با كمترين هزينه به گياه مدل توتون منتقل شود. بدين منظور ابتدا ناقل دوگانه pCAMBIA 1304 حاوي ژن HBsAg در باكتري Escherichia coli سويه JM107 و اگروباكتريوم سويه LBA4404 كلون و به روش قطعات برگي به گياه توتون منتقل شد. باززايي ريزنمونه هاي تلقيح شده در محيط كشت انتخابي MS حاوي 500 ميلي گرم در ليتر سفوتاكسيم و 15 ميلي گرم در ليتر هيگرومايسين و همچنين تنظيم كننده هاي رشد در غلظت هاي يك ميلي گرم در ليتر BAP و يك دهم ميلي گرم در ليتر NAA انجام گرفت. در آخر پس از رسيدن گياهچه هاي غربال شده به ارتفاع 15 سانتيمتر، به روش CTAB از گياهان تراريخته احتمالي DNA استخراج شد و جهت شناسايي و تاييد حضور ژن با آغازگرهاي اختصاصي واكنش PCR و جهت بررسي بيان ژن واكنش RT-PCR انجام گرفت و بدين ترتيب حضور و بيان اين ژن در گياهان تراريخته توتون تاييد شد.