اثر فاكتورهاي رشد پلاكتي بر احياي سلول‌هاي غشاي آمنيوتيك بعد از فرآيند انجماد غشا آمنيوتيك و بر سلول‌هاي ‌بنيادي ليمبال كشت داده شده روي غشا

Effect of Platelet Growth Factors on Restoration of Amniotic Membrane Cells after Freezing Process

هدف: زخم‌هاي مقاوم به درمان قرنيه، زخم‌هايي هستند كه به درمان‌هاي رايج پاسخ نمي‌دهند. امروزه روش‌هاي درماني متعددي براي درمان زخم‌هاي اپي‌تليال قرنيه به كار‌ مي‌رود از جمله قطره اشك مصنوعي، قطره‌هاي چشمي حاصل از پلاسماي غني از پلاكت، پيوند غشاي آمنيوتيك و پيوند سلول‌هاي بنيادي ليمبال. هدف از اين مطالعه، بررسي تاثير عوامل رشد پلاكتي بر احياي سلول‌هاي اپي‌تليال غشاي آمنيوتيك و غني‌سازي سلول‌هاي بنيادي ليمبال كشت داده شده بر روي غشاي آمنيوتيك توسط ليزات پلاكتي انساني غني از عوامل رشد‌ مي‌باشد. روش پژوهش: در اين مطالعه تجربي، تعداد 5 غشاي آمنيوتيك تهيه شد و پس از فرآيند انجماد و تيمار با ليزات پلاكتي، ميزان Viability (زنده بودن) سلول‌هاي آن ارزيابي گرديد. به علاوه سلول‌هاي بنيادي ليمبال به دست آمده از قرنيه انسان پس از تاييد ماهيت، با بررسي ماركر‌هاي اختصاصي سلول‌هاي بنيادي ليمبال، 63P و Vimentin، توسط روش ايمونوسايتوشيمي، بر سطح غشاي آمنيوتيك كشت داده شدند و بعد از تيمار با ليزات پلاكتي، از نظر ميزان Viability (زنده بودن سلول‌ها) بررسي گرديدند. يافته‌ها: بررسي ميزان Viability (زنده بودن) سلول‌ها‌ افزايش معناداري در فواصل زماني 24 ساعت، 72 ساعت و يك هفته در غشاي آمنيوتيك تيمار شده با ليزات پلاكتي پس از فرآيند انجماد (فريز) ميان گروه‌هاي مورد آزمايش و شاهد، آزمايش و Fresh و شاهد و Fresh نشان داد. بررسي ماركرهاي اختصاصي سلول‌هاي بنيادي ليمبال، 63P و 75P، تاييدكننده ماهيت سلول‌هاي بنيادي ليمبال است. نتايج ارزيابي زنده بودن سلول‌هاي بنيادي ليمبال نشان‌دهنده افزايش معني‌دار در زمان‌هاي 24 ساعت و72 ساعت پس از كشت روي غشاي امنيوتيك و تيمار با ليزات پلاكتي مي‌باشد، اما اين افزايش در مدت زمان يك هفته معني‌دار نيست. نتيجه‌گيري: ليزات پلاكتي غني از عوامل رشد قادر است ميزان زنده بودن سلول‌هاي اپي‌تليال غشاي آمنيوتيك و سلول‌هاي بنيادي ليمبال را افزايش دهد. به اين ترتيب استفاده از سلول ليمبال كشت داده شده روي غشاي آمنيوتيك و تيمار آن با ليزات پلاكتي در پيوند اتولوگ و آلوژن سلول ليمبال به چشم‌هاي مبتلا به نقص ليمبال سلول‌هاي بنيادي بسيار كمك‌كننده خواهد بود.

Purpose: Dormant corneal ulcers do not respond to common treatments. Today, several therapies are used to treat epithelial corneal ulcers, including artificial tear, ocular droplets derived from platelet-rich plasma, amniotic membrane transplantation, and limbal stem cell transplantation. The aim of this study was to evaluate the effect of platelet growth factors on the recovery of amniotic membrane epithelial cells and limbal stem cells grown on amniotic membrane. Methods: In this experimental study, 5 amniotic membranes were prepared and after freezing and treatment with platelet lysate, the viability of the cells was evaluated. The limbal stem cells obtained from the human cornea were immune characterized for P63 and vimentin markers. The limbal stem cells seeded on the surface of amniotic membrane and after treatment with platelet lysates, the viability of the cells was evaluated. Results: The viability rate was significantly increased at 24 hours, 72 hours, and 1 week intervals in the amniotic membrane treated with platelet lysate after the freezing process. The results of viability in Limbal stem cells indicated a significant increase at 24 hours and 72 hours after culture on the amniotic membrane fortified by platelet lysate. However, this increase was not significant during one week. Conclusion: The results of this study showed that platelet lysates could increase the viability amniotic membrane cells and limbal stem cells; thus, using the cultured limbal cell on amniotic membrane fortified by platelet lysates will be helpful to limbal cell defects cases.