تاثير افزايش بيان miR-579 بر ژن‌هاي BAX و CDKN1A در رده سلولي گليوبلاستوما

Effect of miR-579 overexpression on the BAX and CDKN1A genes in the Glioblastoma cell line

اهداف: گليوبلاستوما مولتي‌فرم يكي از انواع سرطان‌هاي مغزي است كه پاسخ مناسبي به درمان نشان نمي‌دهد. پيش‌آگهي بد اين بيماري به‌دليل وجود حالت مقاومت به پرتو و شيمي‌درماني است. هدف مطالعه حاضر توليد ويروس لنتي حامل پيش‌ساز miR-579 و بررسي تاثير افزايش بيان miR-579 بر بيان ژن‌هاي BAX و CDKN1A در رده سلولي گليوبلاستوما بود. مواد و روش‌ها: در مطالعه تجربي حاضر براي توليد ويروس لنتي نوتركيب قطعه ژني حاوي توالي پيش‌ساز miR-579 در پلاسميد pCDH همسانه‌سازي شد. سازه نوتركيب به‌همراه پلاسميدهاي psPAX و pMD2 به سلول‌هاي HEK293T انتقال داده شد. ذرات ويروسي با روش اولتراسانتريفيوژ تغليظ شدند. تيتر ويروسي با روش فلوسايتومتري محاسبه شد. ذرات ويروسي توليدشده به دومان سلولي A-172 انتقال داده شدند. در نهايت با بهره‌گيري از روش PCR در زمان واقعي تغييرات، سطوح بياني miR-579 و ژن‌هاي BAX و CDKN1A بررسي شدند. يافته‌ها: حضور پيش‌ساز ژن miR-579 در پلاسميد با كمك روش‌هاي كلوني PCR و توالي‌يابي مورد تاييد قرار گرفت. بررسي‌ها نشان دادند كه سطح بيان miR-579 در سلول‌هاي آلوده‌شده با ويروس نوتركيب در مقايسه با گروه كنترل افزايش هفت‌برابري يافت. افزايش بيان miR-579 منجر به افزايش بيان ژن BAX تا سه‌برابر شد اما در مقابل تغيير معني‌داري در بيان ژن CDKN1A مشاهده نشد. نتيجه‌گيري: افزايش بيان miR-579 در رده سلولي A-172 مي‌تواند بيان ژن BAX را افزايش دهد؛ اما در بيان ژن CDKN1A تغيير معني‌داري ايجاد نمي‌كند.

Aims Glioblastoma multiforme is a type of brain cancers that do not respond well to treatment. The poor prognosis of this disease is due to the presence of radiation resistance and chemotherapy. The purpose of the present study was to produce miR-579 precursor carriers and investigate the effect of increased expression of miR-579 on the expression of BAX and CDKN1A genes in the glioblastoma cell line. Materials & Methods In this experimental study, in order to produce recombinant lentiviral vectors, a gene containing the miR-579 precursor sequence was cloned into pCDH the plasmid. The recombinant structure was transmitted to the cells of HEK293T with psPAX and pMD2 plasmids. Viral particles were concentrated using Ultra Centrifuge. Viral titration was calculated by flow cytometry. The viral particles produced were transferred to the A-172 cell line. Finally, by using Real-Time PCR, changes in expression levels of miR-579 and BAX and CDKN1A genes were investigated. Findings The presence of miR-579 gene precursor in the plasmid was confirmed by colony PCR and sequencing methods. The study showed that the level of miR-579 expression in infected cells with the recombinant virus was found to be up-regulated seven-fold compared to the control group. miR-579 increased the BAX gene expression by three times. But, there was no significant change in the expression of CDKN1A gene expression. Conclusion Increased expression of miR-579 in the A-172 cell line could increase the expression of BAX gene. However, the CDKN1A gene expression does not change significantly.