پديد آورندگان :
پيرنيا، افشين دانشگاه آزاد اسلامي واحد علوم و تحقيقات تهران - دانشكده علوم پايه , پريور، كاظم دانشگاه آزاد اسلامي واحد علوم و تحقيقات تهران - دانشكده علوم پايه , يغمايي، پريچهر دانشگاه آزاد اسلامي واحد علوم و تحقيقات تهران - دانشكده علوم پايه , حمادي، مسعود دانشگاه علوم پزشكي جندي شاپور اهواز - دانشكده پزشكي , غلامي، محمدرضا دانشگاه علوم پزشكي كرمانشاه - دانشكده پزشكي - دكتراي علوم تشريحي - گروه علوم تشريحي
چكيده فارسي :
اسپرماتوژنز پستانداران از سلول‌هاي بنيادي اسپرماتوگوني (SSCs) منشاء مي‌گيرد. درمان‌هاي ضد سرطان، اعم از پرتودرماني يا شيمي‌درماني، با هدف قرار دادن اين سلول‌هاي پرتكثير مي‌توانند باعث ناباروري شوند. در مردان بالغ مبتلا به سرطان، انجماد اسپرماتوزوئيدها قبل از شروع درمان راه حفظ باروري در طي روند درمان است؛ اما در پسران نابالغ به دليل نبود اسپرماتوزوئيد، انجام اين كار مقدور نيست. هدف اين مطالعه بررسي اثر آلژينات بر كاهش اثرات سوء انجماد-ذوب بر پتانسيل SSCs و حفظ اين سلول‌ها در بچه‌هاي سرطاني است كه تحت شيمي‌درماني يا راديوتراپي قرار مي‌گيرند.
مواد و روش‌ها: SSCs از بيضه موش‌هاي 6 روزه نابالغ Balb/C جداسازي شدند. خالص‌سازي به‌وسيله آنتي‌بادي‌هاي Thy-1 و c-kit به روش MACS انجام گرفت. اين سلول‌ها در هيدروژل آلژينات انكپسوله و منجمد شدند. بعد از ذوب سلول‌ها تعيين درصد سلول‌هاي زنده انجام گرفت. پس از استخراج RNA و ساخت cDNA بررسي بيان ژن‌هاي Oct4، Sall4، Plzf، Dazl، Etv5، Bcl6b، Lin28 و Nanog به روش Real time-PCR RT صورت گرفت. براي آناليز نتايج از نرم‌افزار آماري SPSS و براي تجزيه و تحليل بيان ژن از نرم‌افزار Rest استفاده گرديد.
نتايج: درصد سلول‌هاي زنده پس از انجماد در گروه سلول‌هاي انكپسوله در آلژينات نسبت‌به گروه كنترل كاهش آماري معني‌داري را نشان نمي‌دهد. در گروه انجماد با انكپسوله‌سازي در آلژينات بيان ژن‌هاي Lin28 و Sall4 افزايش‌يافته (0001/0P<، 0001/0P<) و بيان ژن Dazl كاهش‌يافته است (0001/0P<).
نتيجه‌گيري: اين مطالعه نشان مي‌دهد كه استفاده از آلژينات به‌عنوان يك داربست در حفاظت سرمايي SSCs مي‌تواند براي حفظ پتانسيل بنيادي اين سلول‌ها مؤثر باشد.
چكيده لاتين :
Spermatogonial stem cells (SSCs) are the foundation of spermatogenesis. Cancer treatments such as
chemotherapy or radiotherapy by targeting of these high proliferating cells can cause infertility. In pubertal male patients,
cryopreservation of spermatozoa before chemotherapy is the way for fertility preservation during treatment. However, for
prepubertal male patients, because of the absence of spermatozoids, this is not possible. The aim of this study is the
investigation of the effect of alginate hydrogel in reduction of cryopreservation effects on SSCs potential and preserve of
these cells in cancer childhoods that undergoes chemotherapy or radiotherapy.
Methods: SSCs were isolated from the testes of Balb/c mice pups (6 days old), purified by MACS with Thy-1 and c-kit
microbeads, encapsulated in alginate hydrogel and then cryopreserved. After thawing, cell viability was evaluated. After
RNA was isolated and cDNA was synthesized, the expression of stemness genes Oct4, Sall4, Plzf, Dazl, Etv5, Bcl6b, Lin28,
and Nanog was considered using RT Real-time PCR. Statistical analyses were performed using SPSS. Gene expression was
analyzed with REST software.
Results: Cell viability after cryopreservation show no significant decrease in alginate encapsulated cells group compared
to control group. Lin28 and Sall4 genes were significantly upregulated (P<0.0001, P<0.0001), whereas Dazl was
upregulated (P<0.0001) after SSCs cryopreservation in alginate hydrogel.
Conclusion: This study indicates that use of alginate as scaffold in SSCs cryopreservation can be effective for stemness
preservation of these cells.
