همسانه سازي مولكولي و بيان ژن سوماتومدينCدر سيستم باكتريايي

Molecular cloning and expression of Somatomedin C in bacterial system

سيستم هاي باكتريايي، به ويژه باكتري اشرشيا كولي، با توجه به مزيتهايي از قبيل هزينه پايين،سهولت كشت و سرعت رشد بالا به عنوان اصليترين سيستم بيان پروتيينهاي دارويي نوتركيب به شمار ميروند. در اين پژوهش، از اين سيستم براي بيان ژن سوماتومدين C به عنوان يك فاكتور ارزشمند رشد انساني استفاده شد cDNA اين ژن پس از تهيه و تكثير، با استفاده از آنزيم هاي برشي NdeI و BamHI داخل ناقل بياني همسانه سازي شد. نتيجه اين همسانه سازي، توليد ناقل نوتركيبي بود كه در آن ژن سوماتومدين Cتحت كنترل پيشبر القايي T7 قرار گرفت. ناقل نوتركيب حاصل به سلول هاي باكتري E. coliانتقال داده شد و بيان پروتيين تحث تاثير القا بوسيله غلظت هاي يك مولارIPTGمورد ارزيابي قرار گرفت. نتيجه نشان داد كه القاي باكتري-هاي تراريخت به مدت 22 ساعت در دماي 25 درجه سانتيگراد منجر به توليد مقادير قابل توجه از اين پروتيين انساني نوتركيب در باكتري ميشود

Because of several advantages such as low cost, simple culture, and high growth rate, bacterial systems, in particular Escherichia coli, are the main expression system for production of recombinant pharmaceutical proteins. In this research, we used this system to produce a valuable human growth factor, somatomedin C. cDNA of this gene was prepared and cloned into an expression vector using NdeI and BamHI restriction sites. The cloning process resulted in the generation of a recombinant vector in which the somatomedin cDNA was placed under control of the T7 inducible promoter. This recombinant vector was introduced into the E. coli and the protein expression was evaluated following induction with 1 M IPTG solution. The results showed that transgenic bacteria produce noticeable amount of human protein after 22 hrs induction at 25 degree centigrade.