غربالگري غير تهاجمي ماركر تومور S249C ژن FGFR3 به روش TETRA-ARMS-PCR در سلول‌هاي اپي‌تليال ادراري در بدخيمي مثانه

Detection of FGFR3 Gene S249C Mutation in Urinary Epithelial Cell by Tetra-Arms-Pcr Method in Patients With Bladder Tumors

مقدمه: تغيير‌ ژنتيكي ژن FGFR3 يكي از عوامل مؤثر در ابتلاي به سرطان مثانه است. FGFR3 ‌‌گيرنده‌ي تيروزين‌كيناز دخيل در كنترل چرخه‌ي سلولي و رگ‌زايي است. بررسي‌هاي پيشين نشان مي‌دهد كه جهش‌هاي فعال‌كننده ژن fgfr3 در بيش از 50 درصد ‌كارسينوماي اوليه سلول اپي‌تليال مثانه وجود دارد و از اين روي مي‌تواند به عنوان ماركر‌ تومور‌ در شناسايي زود هنگام سرطان مثانه كاربرد داشته باشد. هدف: غربالگري غير‌تهاجمي، شناسايي جهش ‌S249C ‌در ژن FGFR3 به روش tetra primers Arms PCR و تعيين ارتباط بين حضور اين جهش و مراحل اوليه‌ي سرطان مثانه در شمال كشور. مواد و روش‌ها: در اين مطالعه تجربي سلول‌هاي اپي‌تليال‌‌ ادرار 100 بيمار دچار تومور مثانه جدا شده و DNA آنها با استفاده از كيت تجاري بيرون آوري شد.پس از مطالعات بيوانفورماتيك، آغازگر‌هاي با جفت باز‌هاي اشتباه مناسب براي جهش S249C نمودارسازي و شناخته شد و پس از بهينه سازي واكنش‌، غربال‌گري بر جمعيت مورد مطالعه‌‌ و آناليز آماري داده‌ها با نرم‌افزار SPSS انجام شد. نتايج: ‌ پرايمرهاي ارمز طراحي شده‌‌ مي‌تواند به خوبي الل‌هاي طبيعي و جهش يافته‌ تومور ماركر S249C را از يكديگر جدا كند. از 100 نمونه،‌‌ در‌ 28 مورد جهش S249C شناسايي شد. آناليز آماري داده‌ها نشان از معني‌دار بودن جهش S249C ‌دارد.(0/0001>p) نتيجه‌گيري: با توجه به غير‌تهاجمي بودن و حساسيت بالاي روش مولكولي توسعه يافته در اين تحقيق مي‌توان از آن به عنوان ‌روش غربالگري اوليه در شناسايي زود به هنگام سرطان مثانه استفاده كرد

Introduction: Genetic variation of FGFR3 gene is one of the factors affecting the bladder tumor. FGFR3 is a tyrosine kinase receptor, involved in controlling the cellular and angiogenesis cycle. This protein affects a variety of diseases and cancers and cartilage growth abnormalities. Regarding the high activity of fgfr3 mutations in more than 50% of primary tumors of bladder urethral cells, it was suggested in this stage that the gene is involved in tumor-forming epithelial cells. Objective: the aim of this study was to detect S249C mutation in FGFR3 gene through tetra primers arms PCR and to determine the association between the presence of this mutation and the early stages of bladder cancer in the north of the country. Materials and Methods: in this study, after separation of epithelial cell in the urine of 100 patients with bladder tumor, their DNA was extracted using a commercial kit. After bioinformatics studies, primers with appropriate pair of mutants were designed and synthesized for the S249C mutation. After optimization of the reaction, screening was performed on the population and the data were analyzed using SPSS software. Results: Our results showed that primers designed to differentiate well between normal alleles and mutants in the epithelial cell of 28 patients with bladder tumor ,S249C mutations were identified p<0.0001. Statistical analysis of the data indicates the significance of this mutation. Conclusion: The mutation of S249C FGFR3 gene was identified in 28% of the population studied and is considered a potential risk, although more and more studies are needed to confirm the results.