مقايسه تشخيص عفونت سيتومگالوويروس در سقط هاي خودبخودي به روش كشت سلولي و روش مولكولي واكنش زنجيره اي پلميراز (PCR)

Comparison the Diagnostic Value of Culture and Polymerase Chain Reaction Methods in Diagnosis of Cytomegalovirus Infections in Spontaneous Abortions

مقدمه: عفونت سيتومگالوويروس، رايج ترين عفونت ويروسي در دوران بارداري مي باشد. روش هاي متداول شناسايي اين عفونت شامل: روش كشت ويروس، آزمون PCR و الايزا مي باشد. مطالعه حاضر با هدف ارزيابي و مقايسه روش كشت سلولي و روش مولكولي PCR در تشخيص عفونت هاي سيتومگالوويروس در سقط هاي خودبخودي انجام شد. روش‌كار: اين مطالعه مقطعي در سال 91-1390 بر روي 110 زن با سابقه سقط غير عمد در بيمارستان هاي آموزشي دانشگاه علوم پزشكي تهران انجام شد. براي كشت، 15 سي سي از خون مادران در لوله هاي حاوي سيترات ريخته شد و 5 سي سي فايكول اضافه شد و نمونه با دور 5000 به مدت 5 دقيقه سانتريفيوژ شد. پس از جدا شدن لايه بافي كت، اين لايه با محيط كشت DMEM مخلوط و در رده سلولي MRC-5 تلقيح شد و پس از 72 ساعت از لحاظ انكلوزيون سلولي بررسي شد. نمونه ها همچنين به روش PCR از لحاظ حضور اسيدنوكلئيك ويروسي مورد بررسي قرار گرفتند. نتايج حاصل از دو روش با استفاده از آزمون كاي مورد تجزيه و تحليل قرار گرفت. ميزان p كمتر از 0/05 معني دار در نظر گرفته شد. يافته‌ها: از 110 مادر مورد مطالعه، 5 نفر (4/5%) از لحاظ كشت، در رده هاي سلولي MRC-5 (سلول هاي فيبروبلاست ريوي انسان) مثبت بودند در حالي كه در آزمون PCR، 6 مورد (5/4%) مثبت بودند. حساسيت و ويژگي كشت به ترتيب 83/3 و 100 درصد بود در حالي كه حساسيت و ويژگي آزمون PCR، 100 درصد به دست آمد. نتيجه‌گيري: روش كشت در رده هاي سلولي، احتمالاً به تنهايي براي تشخيص عفونت كفايت نمي كند. روش هاي تشخيصي PCR و الايزا به منظور ارزيابي دقيق عفونت ضروري مي باشد و PCR مي تواند جايگزين روش كشت شود.

Introduction: Cytomegalovirus (CMV) infection is the most common viral infection during pregnancy. Current recognition methods are including culture, PCR and ELISA. The aim of this study was to evaluate and compare the diagnostic value of culture and PCR in cytomegalovirus infection in spontaneous abortion. Methods: This cross-sectional study was conducted on 110 women with unintentional abortion who referred to educational hospitals of Tehran university of medical sciences during 2011 and 2012. For culturing, 15cc of mother’s blood was decanted in citrated tubes. 5cc of Ficoll was added and centrifuged for 5 min at 5000 rpm. After separating the buffy coat layer, it was mixed with DMEM medium and inoculated into MRC-5. Cell inclusion was evaluated after 72 hours. Samples also were evaluated by PCR for presence of DNA of CMV. The results of two methods were analyzed using chi-square test. P value less than 0.05 was considered significant. Results: Of 110 women, 5 cases (4.5%) were positive in cultures on MRC-5 cell line (Human lung fibroblast cells), however, in PCR test, 6 cases (5.4%) were positive. Sensitive and specificity of culture was 83.3 and 100%, respectively, and both sensitivity and specificity of PCR were 100%. Conclusion: Culture on cell line is not probably adequate in diagnosis of infection and PCR and ELISA are essential for exact evaluation of infection. PCR could be an alternative of culture method.