اثر حفاظتي بوريك اسيد و بتا مركاپتو اتانول بر روي مهار شدن آنزيم اوره‌آز در برابر پراكسيد هيدروژن

Protection effect of boric acid and β-mercaptho ethanol against H2O2 inactivation of Urease

آنزيم اوره‌آز جزء خانواده آميدو هيدرولازها (EC: 5. 1. 5. 3) مي‌باشد كه توسط گياه لوبياي جك توليد مي شود و اين ارگانيسم را قادر مي‌سازد كه اوره را هيدروليز و ايجاد آمونياك و دي اكسيد كربن نمايد. مطالعات سينتيكي اين آنزيم با استفاده از تكنيك اسپكتروفتومتري در ناحيه ماوراء بنفش در دماي oC 40 و در سه pH 5/5، 7/2 و 8 انجام گرفت. نتايج به‌دست آمده نشان‌دهنده سينتيك مهاري وابسته به pH اوره‌آز توسط پراكسيد هيدروژن مي‌باشد. بيش ترين اثر مهاري در pH بازي (8=pH) اتفاق افتاده و اثر مهاري پراكسيد هيدروژن در pH اسيدي (5/5=pH) حداقل مي‌باشد، در نتيجه پارامترهاي سينتيكي Km و Vmaxآنزيم اوره‌آز كه توسط معادله لينوريور-برگ در غياب پراكسيد هيدروژن محاسبه شده است، به‌ترتيب معادل 4/52 ميلي‌مولار و 1/03 ميلي‌مولار بردقيقه مي‌باشند. در حضور پراكسيد هيدروژن و با افزايش pH مقدار Km و Vmax به ترتيب افزايش و كاهش مي‌يابند. همچنين نتايج نشان دادند كه بوريك اسيد و بتا مركاپتو اتانول اثر حفاظتي در برابر مهارشدن آنزيم در 8=pH انجام مي‌دهند. اثر حفاظتي بتامركاپتواتانول در برابر پراكسيد هيدروژن براي آنزيم اوره‌آز نسبت به بوريك اسيد بيشتر مي‌باشد، به‌طوري‌كه بتامركاپتواتانول و بوريك اسيد در غلظت مشابه (30 ميلي‌مولار) به‌ترتيب 90 و 80 درصد حفاظت در برابر پراكسيد هيدروژن براي آنزيم اوره‌آز ايجاد نمودند.

Urease (urea amidohydrolase, EC 3.5.1.5) catalyzes the hydrolysis of urea to produce ammonia and CO2. Kinetics studies have been performed using UV-vis spectrophotometer at 40oC and pHs 5.5, 7.2, 8. Result showed that urease inhibition by hydrogen peroxide is a kinetics pH-dependent, such that inhibition is maximal on the condition of pH value 8 while the inhibitory effect hydrogen peroxide at pH 5.5 was minimum. The kinetic parameters Km and Vmax enzyme obtained from Lineweaver–Burk plot in absence of hydrogen peroxide was 4.52mM and 1.03mM.min-1 respectively .In presence of H2O2, increasing pH leads to decrease Vmax and km. The results showed that in pH 8, boric acid and β-mercaptho ethanol protected urease against hydrogen peroxide. Protectable of β-mercaptho ethanol is more than of boric acid. Such, the results demonstrates that 30 mM boric acid and β-mercaptho ethanol afforded to protect 80% and 90% of urease activity from the loss as compared to the respective control samples