جداسازي و شناسايي باكتري‌هاي نمك‌دوست توليدكننده آنزيم ليپاز از تالاب ميانكاله

Isolation and Identification of Halophilic Bacteria Producing Lipase from Miankaleh Wetland

ليپازها يكي از پركاربردترين آنزيم‌ها در بيوتكنولوژي و شيمي آلي هستند و به عنوان سومين آنزيم صنعتي از اهميت فراواني برخوردار مي‌باشند. بسياري از ارگانيسم‌ها توانايي ترشح آنزيم ليپاز را دارند اما در ميان آن‌ها باكتري‌ها اهميت بيشتري دارند چراكه ليپازهاي حاصل از باكتري‌ها داراي ويژگي‌هاي منحصر به فردي مانند پايداري بالا و عدم ايجاد واكنش‌هاي جانبي هنگام كاتاليز مي‌باشد. ازآنجايي كه پروسه‌هاي صنعتي همواره تحت شرايط ويژه و سختي انجام مي‌شوند، يافتن آنزيم‌هايي با توانايي فعاليت در اين شرايط حائز اهميت است. باكتري‌هاي نمك‌دوست منبع مناسبي از اين آنزيم‌ها مي‌باشند، چراكه آنزيم‌هاي توليد شده توسط اين ميكروارگانيسم‌ها مي‌توانند فعاليت خود را در دامنه‌هاي مختلف دما، غلظت نمك و pH حفظ كنند. در شهريور سال 1394 با هدف جداسازي باكتري‌هاي نمك‌دوست توليدكننده آنزيم ليپاز و بهينه سازي شرايط رشد جدايه‌ها نمونه­برداري از آب، خاك و رسوب تالاب ميانكاله واقع در استان مازندران صورت گرفت. براي كشت و خالص‌سازي، نمونه‌هاي رقيق‌شده در محيط كشت جامد تلقيح و در دماي 37 درجه گرمخانه‌گذاري گرديد. غربالگري باكتري‌ها منجر به جداسازي 10 جدايه نمك‌دوست شد. سويه‌ها ازنظر توليد آنزيم ليپاز با استفاده از سنجش به روش پليت مطالعه شدند. نتايج نشان داد كه از ميان 6 جدايه منتخب 3 جدايه توانايي توليد آنزيم ليپاز را دارند. اين باكتري‌ها به طور بهينه در محيطي با 5-2/5 درصد نمك، دماي 37-35 درجه سانتي‌گراد و رشد مي‌كنند. بررسي فيلوژنيك ترادف 16S rDNA براي 3 سويه انجام شد. اين سويه‌ها از نظر فيلوژنيك در جنس‌هاي Halomonas-و Halobacillus قرار گرفتند. اين مطالعه نخستين بررسي بر روي باكتري‌هاي تالاب بين‌المللي ميانكاله به عنوان يك اكوسيستم حاصلخيز مي‌باشد.

The third important groups of enzymes which have widely used in biotechnology and organic chemistry are lipases. Many organisms have the ability to produce lipase, but bacterial lipase are more substantial because their enzymes have unique features such as high stability and Specific substrate. Since industrial processes are always under harsh conditions, enzymes screening which are stable, is important to work in these conditions. Halophilic bacteria are a good source of these enzymes, due to their activity on different ranges of salt concentration, temperature and pH. In this study, samples were collected from water, soil and sediments Miankaleh wetland in Mazandaran province. For isolation and purification, diluted samples were cultured on solid medium MH (Moderate Halophiles) and was incubated at 37 ° C. finally 10 strains were isolated as halophilic bacteria. Strains were studied based on lipase production. Based on morphological and biochemical similarity, 6 strains were selected for further study. Results showed that among six isolates, three strains have the ability to produce lipase. These bacteria have optimal grow in 5 to 2.5 ℅salt, temperature of 37-35 ° C and pH: 8-10. Analysis of 16S rDNA sequence was performed for 3 strains. This strain were placed on genus: Halomonas and Halobacillus. This research is the first study on international Miankaleh wetland bacteria as a rich ecosystem