بررسي مقاومت آنتي بيوتيكي ايزوله هاي كلبسيلاپنومونيه و ميزان بيان ژنهاي Real-Time PCR بااستفاده ازacrA وoqxA

The study of antibiotic resistance among Klebsiella pneumoniae and expression level of oqxA and acrA genes by using real-time PCR

مقدمه: افزايش مقاومت ضد ميكروبي در بين باكتري هاي گرم منفي خصوصا خانواده انتروباكترياسه به مشكل جهاني تبديل شده است و در نتيجه انتخاب هاي درماني را محدود كرده است. كلبسيلا پنومونيه پاتوژن فرصت طلب گرم منفي است كه به علت ايجاد طيف وسيعي از بيماريها و مقاومت آنتي بيوتيكي امروزه مورد توجه قرار گرفته است. پمپ هاي ترشحي به عنوان يكي از مكانيزم هاي مقاومت به آنتي بيوتيك ها در اين باكتري مطرح است. لذا هدف از اين مطالعه تشخيص ژن هاي acrB, acrA, oqxA, oqxB ، تعيين ميزان بيان پمپ acrA, oqxA و بررسي الگوي مقاومت آنتي بيوتيكي در ميان ايزوله هاي باليني كلبسيلا پنومونيه جداشده از بيمارستان هاي تهران مي باشد. مواد و روشها: در مطالعه حاضر تعداد 83 كلبسيلا پنومونيه از بيماران مراجعه كننده به سه بيمارستان در تهران جمع آوري شدند. تست حساسيت آنتي بيوتيكي با روش ديسك ديفوژن انجام شد. وجود يا عدم وجود ژن هاي مقاومت acrA, oqxB, oqxA و acrB با استفاده از تكنيك PCR بررسي شد. از CCCP به عنوان مهاركننده استفاده شد و سپس ميزان بيان ژن هاي oqxA و acrA از طريق Real-time PCR بررسي شد. نتايج: نمونه هاي مقاوم به فلوروكينولون ها، به اكثر عوامل ضدميكروبي استفاده شده در اين مطالعه هم، مقاومت نشان دادند. اكثريت نمونه ها داراي پمپ هاي OqxAB (96%) و AcrAB (97%) بودند. استفاده از مهاركننده نتايج متفاوتي را در MIC سيپروفلوكساسين نشان داد. Real-time PCR ، افزايش بيان 3/2 برابري پمپ دفعي OqxAB و 4 برابري پمپ دفعي AcrAB در نمونه هاي مقاوم را آشكار ساخت. بحث: وجود ژن هاي مقاومت، افزايش سويه هاي مقاوم به آنتي بيوتيك هاي رايج و افزايش عفونتهاي بيمارستاني و مرگ و مير ناشي از آن همه و همه لزوم تشخيص دقيق باكتري هاي مقاوم و جلوگيري از ايجاد مقاومت هاي جديد و كنترل گسترش مقاومت ها را ضروري مي سازد

Background: The increasing emergence of antimicrobial resistance among gram negative bacteria especially Enterobacteriaceae has become a global problem. Klebsiella pneumoniae is an opportunistic pathogen, which recently due to causing broad spectrum of disease and antibiotic resistance has been lionized. Efflux pumps are one of the antibiotic resistance mechanisms, which were introduced in this bacteria. Therefore, the aims of this study were detection of oqxA, oqxB, acrA and acrB genes, evaluation of expression level of oqxA and acrA genes and determination of antibiotic resistance patterns among Klebsiella pneumoniae isolated at Tehran hospitals. Materials and Methods: In this descriptive study 83 Klebsiella pneumoniae were collected from patients attending to three hospitals in Tehran. Antibiotic susceptibility test was performed by disk diffusion method. The presence of oqxA, oqxB, acrA and acrB resistance genes was detected by PCR. The CCCP was used as efflux pump inhibitor and the oqxA, acrA genes expression level was analyzed by using real-time PCR. Results: The most of strains showed to have OqxAB (96%) and AcrAB (97%) pumps. The use of efflux pump inhibitor showed different results for ciprofloxacin MIC. Real-time PCR assay showed higher expression level of OqxAB (2.3 folds) and AcrAB (4 folds) pumps in resistant strains. Conclusion: The existence of antibiotic resistance genes, increasing of Klebsiella pneumoniae strains, which become resistant to common antibiotics and nosocomial infections, highlights the need for particular detection, prevention