پديد آورندگان :
دباغي، رسول دانشگاه تربيت مدرس - دانشكده علوم پزشكي - گروه هماتولوژي , سليماني، مسعود دانشگاه تربيت مدرس - دانشكده علوم پزشكي - گروه هماتولوژي , بالاقلي، سحر دانشگاه علوم پزشكي تهران - دانشكده پيراپزشكي - گروه هماتولوژي , كرمي، سميرا دانشگاه علوم پزشكي تهران - دانشكده پيراپزشكي - گروه هماتولوژي , احمديه، حميد مركز تحقيقات چشم - دانشگاه علوم پزشكي شهيد بهشتي , رضايي كنوي، مژگان مركز تحقيقات مهندسي بافت چشم - دانشگاه علوم پزشكي شهيد بهشتي
چكيده فارسي :
هدف: بررسي پتانسيل القاي بازسازي شبكيه توسط سلول‌هاي اپيتليوم پيگمانته شبكيه چشم انسان با استفاده از چسب فيبريني به عنوان مكاني براي ذخيره فاكتور 2FGF) fibroblast growth 2factor و تقليد فضاي غشاي عروقي شبكيه.
روش پژوهش: سلول‌هاي اپيتليوم رنگدانه هاي شبكيه (Retinal Pigmented Epithelium: RPE) از گلوب چشم دو فرد بزرگسال فوت شده استخراج شدند و با غلظت‌هاي mg/dl 3:126mg/dl, FG84 :2mg/dl. FG1:42FG چسب فيبريني انكپسوله شدند. نمونه‌هاي تحت تيمار با Fetal Bovine Serum (FBS) با غلظت 20 درصد، به عنوان شاهد در نظر گرفته شدند. اين سلول‌ها از نظر بيان ماركرهاي 6، 8/18 Cytokeratin، 65RPE در سطح پروتيين و بيان ماركرهاي 1-Thy، CRX، NogoA، 2MMP، 2ACTA، 1Integrin-B، 65RPE، 6 PAX در سطح ژن، مورد ارزيابي قرار گرفتند.
يافته‌ها: بيان ژن‌هاي 1Integrin B و 1-Th در غلظت 1FG نسبت به گروه شاهد و بيان ژن 6PAX در غلظت 1FG نسبت به گروه شاهد و 3FG افزايش معني‌داري نشان داد بيان ژن 2MMP در غلظت 1FG سطح بالاتري از بيان را نسبت به ساير غلظت‌ها مشخص كرد اما فقط در مقايسه با غلظت 3FG معني‌دار بود. بيان ژن 65RPE نيز در غلظت‌هاي 2FG و 1FG افزايش معني‌داري را نسبت به گروه شاهد نشان داد ضمن آن كه در هر سه غلظت، كاهش در بيان ژن 2ACTA نسبت به گروه شاهد مشاهده گرديد اما اين كاهش بيان معني‌دار نبود. بيان ژن NogoA نشان‌دهنده كاهش معني‌داري در غلظت 1FG نسبت به شاهد و 3FG مي‌باشد. بيان ژن CRX در همه نمونه‌هاي انكپسوله شده و شاهد، منفي بود. نتايج بررسي‌هاي ايمونوسايتوشيمي نشان‌دهنده عدم بيان پروتيين 6PAX در نمونه‌هاي انكپسوله شده و شاهد در سلول‌هاي RPE بزرگسال بود ولي اين سلول‌ها از نظر بيان پروتيين‌هاي اختصاصي مانند 8/18 cytokeratin و 65RPE هم در نمونه‌هاي شاهد و هم نمونه‌هاي انكپسوله شده مثبت بودند.
نتيجه‌گيري: سلول‌هاي RPE بالغ در غلظت mg/dl 42) 1FG) ضمن حفظ ماهيت خود نشانه‌هايي از pluripotency را بروز دادند كه مي‌تواند نشان‌دهنده توانايي اين سلول‌ها در بازسازي بافت شبكيه باشد. اين اثر به وجود مولكول‌هاي چسبنده مانند فيبرونكتين و لامينين در چسب فيبريني كه منجر به شبيه‌سازي فضاي شبه غشا عروقي شبكيه (Retinal Vascular Membrane: RVM) مي‌شوند و ايجاد بستري براي ذخيره عامل 2FGF و موضعي كردن آن كه منجر به افزايش بيان ژن 6PAX مي‌باشد، مرتبط است.
چكيده لاتين :
Purpose: Retina regeneration through reprogramming process is an interesting topic for the retinal disorders and
regeneration study. This phenomenon naturally happens in a few of amphibians even if the neural retina is
completely removed by surgery. Studies show the critical role of FGF2 factor and RVM microenvironment in
retinal regeneration. Thus, this study pays particular attention to regeneration potential of human RPE cell under
the influence of the fibrin glue 3D structure as FGF2 reservoir and RVM like space.
Methods: hRPE cells were isolated from donor eyes of two adult humans. The cells were encapsulated with three
concentrations of fibrin glue (FG1:42mg/dl, FG2:84mg/dl, FG3:126mg/dl) and FBS treated with 20% concentration
was considered as control. Gene expressions of PAX6, MMP2, RPE65, ACTA2, CRX, Thy-1, NogoA, and Integrin-
B1 were analyzed, using real-time PCR.
Results: Gene expression of Integrin B1 and Thy-1 were significantly higher in FG1-treated cells compared to
controls. Also, PAX6 gene expression in FG1 concentration compared to control and FG3 showed a significant
increase, while expression of MMP2 gene expression at FG1 concentration showed a higher expression level than
other concentrations, but only significant compared to FG3. RPE65 expression in FG1, FG2 concentrations shows a
significant increase compared to control; ACTA2 gene expression was lower than 3 concentrations compared to
control, but it was not significant. Also, expression of NogoA gene showed a significant decrease in FG1
concentration compared to control and FG3. In addition, the expression of the CRX gene was negative in all
treatments and control. The immunocytochemistry results indicate that PAX6 protein is not expressed in
incubated specimens and controls in adult RPE cells, but these cells express specific proteins such as RPE65,
cytokeratin8.18 in both control and incubated specimens are positive.
Conclusion: Adult RPE cells at the concentration of FG1 (42 mg/dl) maintain certain adult characteristics, but
exhibited signs of multipotency, which could indicate the potential of these cells for retinal tissue regeneration.
This effect appears to be due to the presence of adhesion molecules such as Fibronectin and Laminin in fibrin glue
that simulates the RVM like space, as well as the creation of an FGF2 reservoir and its localization, which leads to
an increase of the PAX6 gene expression.
