عنوان مقاله :
استخراج كندروئيتين سولفات از غضروف ماهي خاوياري (Acipenser stellatus) و بررسي اثر القايي آن بر تكثير فيبروبلاست انساني
عنوان به زبان ديگر :
Extraction of Chondroitin Sulfate From Cartilage Sturgeon, Stellate Sturgeon (Acipenser stellatus) and its Inductive Effect on Human Fibroblast Proliferation
پديد آورندگان :
دلشاد، سعيد دانشگاه آزاد اسلامي لاهيجان - دانشكده علوم پايه , كريم‌زاده، كتايون دانشگاه آزاد اسلامي لاهيجان - دانشكده علوم پايه , مصطفايي، علي دانشگاه علوم پزشكي كرمانشاه - - گروه ايمونولوژي
كليدواژه :
ماهي ازون برون , كندرويتين سولفات , غضروف , تكثير سلولي
چكيده فارسي :
زمينه: كندروئيتين سولفات‌ها از مهم‌ترين گليكوز آمينوگليكان‌هاي موجود در ماهيان خاوياري مي‌باشند كه در غضروف اين ماهيان حضور دارند. اين تركيبات علاوه بر اهميت در صنايع غذايي، آرايشي و بهداشتي، از اهميت باليني در درمان آرتروز و ترميم زخم نيز برخوردار هستند.
مواد و روش‌ها: در تحقيق حاضر استخراج كندروتين سولفات (CS) از غضروف ماهي ازون برون (25/0 گرم پودر غضروف ماهي در 10 ميلي‌ليتر بافر PBS1X) توسط هضم آنزيمي تريپسين وپپسين در زمان‌هاي 12 و 18 ساعت و با استفاده از نمك كاتيوني ستيل پيريونيوم كلرايد (روش CPC) انجام شد. به منظور بررسي تأثير كندروتين سولفات بر القاي تكثير فيبروبلاست‌هاي جدا شده از پوست انسان از روش رنگ‌سنجي MTT در دوره‌هاي زماني 24، 48 و 72 ساعت استفاده گرديد. بهترين زمان و مناسب‌ترين هضم آنزيمي توسط تيمار حرارتي با آنزيم‌هاي تريپسين وپپسين از روي الگوي الكتروفورز SDS-PAGE انتخاب شده و آناليز FT-IR جهت شناسايي نوع كندروئيتين سولفات تخليص شده بكار رفت.
يافته‌ها: با توجه به الگوي الكتروفورز، تيمار آنزيمي تريپسين با مدت زمان 18 ساعت بيشترين هضم پروتئيني را نشان داد. در اين شرايط بازده توليد كندروئيتين سولفات برابر 76/4 درصد تخمين زده شد. حضور كندروئيتين سولفات از نوع چهارم (C4S) توسط آناليز FT-IR مشخص گرديد. كندروئيتين سولفات‌هاي استخراجي از غضروف تأثير افزايشي وابسته به غلظت بر ميزان تكثير سلول‌هاي فيبروبلاست را نشان داد، به طوري كه در غلظت 10 ميكروگرم بر ميلي‌ليتر بيشترين افزايش تكثير برابر با 167 درصد، نسبت به كنترل در سلول‌هاي فيبروبلاست مشاهده گرديد.
نتيجه‌گيري: كندروتين سولفات تخليص شده به صورت وابسته به دوز داراي اثر تحريكي بر رشد سلول‌هاي فيبرويلاست مي‌باشد، لذا مي‌‍‌تواند در فرايندهاي التيام و ترميم زخم و القاي تكثير سلول‌هاي فيبروبلاست مؤثر واقع شود.
چكيده لاتين :
Background: Chondroitin sulfates (CS) is one of the essential glycosaminoglycan’s which is found in sturgeon fishes and exists in the cartilage part of these fishes. In addition to food and cosmetic industries, these compounds have significant medical and clinical applications, mainly in the treatment of arthritis and wound healing.
Materials and Methods: In this study, the chondroitin sulfate extraction was performed using pepsin and trypsin enzyme digestions in 12 and 18 hours intervals followed by cationic salt, cetyl pyridinium chloride (CPC) treatment. To investigate the effect of Chondroitin sulfate on induction of proliferation of fibroblasts isolated from human skin, MTT assay method was used, which was applied at different incubation times (24, 48 and 72 h). To determine the proper time and enzymatic digestion, after temperature treatment of samples using pepsin and trypsin enzymes, the SDS-PAGE electrophoresis was used. Moreover, the FT-IR analysis was performed to characterize the type of CS.
Results: The maximum yield of enzymatic digestion was observed for trypsin digestion at 18h, according to electrophoresis patterns. The amount of CS yield was estimated at 4.76% in this situation. FT-IR analysis revealed that the CS belongs to the C4S type. Chondroitin sulfates extracting from cartilage showed the concentration-dependent effect on fibroblast cell proliferation. This dose-response effect showed 167% increase in proliferation at 10 µg/ml dose of CS compared to the control in fibroblast cells.
Conclusion: Extracted CS has a positive stimulatory effect on fibroblast cells proliferation in a dose-dependent manner. So it can be used for fibroblast prolioferation induction for wound healing and repairing damaged tissues.
