افزايش قدرت سولفورزدايي بيولوژيك از طريق كلونينگ و بيان ژن اكسيدوردوكتاز بدست آمده از باكتري رودوكوكوس اريتروپوليس IGTS8 با استفاده از وكتور بياني

Enhansment of Biodesulfurization activity via the over expression of the oxidoreductase gene from R.erytheropolis IGTS8using pet 21a vector

سابقه و هدف: بيودسولفوريزاسيون يك روش ميكروبي است كه طي آن با استفاده از سويه‌هاي بهينه شده باكتريايي سعي در افزايش توان قدرت گوگردزدايي از تركيبات نفتي مي‌شود، يكي از روش‌هاي موثر استفاده از ژن‌هاي اكسيدوردوكتاز افزايش يافته مي‌باشد كه FMNH2 مورد نياز براي فعاليت ژن‌هاي گوگردزدايي را در دسترس قرار مي‌دهند. در اين مطالعه ژن اكسيدوردوكتاز باكتري رودوكوكوس اريتروپوليس IGTS8 كه به عنوان يك سويه مدل در تحقيقات گوگردزدايي مطرح است با استفاده از تكنيك PCR بدست آمد. سپس براي بدست آوردن بيان بالاتر از وكتور بياني PET21a استفاده شد. مواد و روش‌ها: پلاسميد نوتركيب PTZ57 or از باكتري Ecoli-DH5α استخراج و توسط آنزيم‌هاي محدود كننده EcorΙ وHindΙΙΙ برش داده شد كه ژن اكسيدوردوكتاز به طول bp 600 جدا شد سپس در وكتورهاي بياني مختلف PKK و PET-21a كلون گرديد و براي بررسي بيان سيتوپلاسمي پروتئيني مورد نظر پس از القاء با IPTG در زمان‌هاي مختلف بر روي ژل آكريل آميد برده شد. يافته ها: پس از تاييد وجود ژن اكسيدوردوكتاز در پلاسميد PTZ57R بوسيله PCR اين ژن در وكتور بياني PKK كلون شد كه در شرايط القايي يك باند ضعيف بر روي ژل SDS-page درناحيه KDa 25 نشان داد. كه براي بدست آوردن بيان بالاتر از وكتور PET-21a استفاده شد كه باند شارپي را در همان ناحيه نشان داد. نتيجه‌گيري: جداسازي كلونينگ و بيان انبوه ژن اكسيدوردوكتاز در باكتري Ecoli منجر به افزايش قدرت بيان ژن‌هاي گوگردزدائي در سويه‌هاي مهندسي شده مي‌شود

Introduction: Biological desulforezation is a microbial procedure which uses manipulated bacterial strains for increasing of desulforezation from petroleum products. Materials and methods: The method is being tested by several big oil companies for making a safe fuel and for preventing air pollution one of the methods for enhancement of desulforezation of microbial oil strains is increasing of copy number of oxidoreductase gene. this gene is able to supply the required FMNH2 for desulforezation genes of Rhodococcus erythropolis IGTS8 , which is used as a model micro organism in desulforezation researches, was amplified with PCR and was cloned in to the PTZ57R vector. Then the oxidoreductase gene was extracted by agarose gel DNA extraction kit as a 600 bp fragment and was inserted in to the pkk223-3 expression vector. Result: After induction, the desired protein was weakly detected as a 25 KD band in SDS-PAGE gel . However using another expression vector(PET 21a), a sharp band was detected in the same area. Discussions: At present , the studies was focused on increasing the production in National Instutute of genetic Engineering and bio technology we are trying to apply genetic Engineering tools to increase gene dosage of oxidoreductase gene to enhancement of desulforezation gene expression