تشخيص باسيلوس كواگولانس در محصولات پروبيوتيك به روش مولكولي PCR

Detection of Bacillus Coagulans in Probiotic Products by PCR Molecular Method

مقدمه: پروبيوتيك‌ها ميكروارگانيسم‌هاي زنده‌اي هستند كه اگر در مقادير كافي تجويز گردند اثرات مفيد سلامتي بر روي ميزبان خواهند داشت. باسيلوس كواگولانس يك باكتري پروبيوتيكي گرم مثبت، هوازي تا غير هوازي اختياري، كاتالاز مثبت، اكسيداز منفي و توليد كننده اندوسپور مي باشد. هدف از اين مطالعه شناسايي سريع مولكولي باسيلوس كواگولانس در محصولات پروبيوتيك است كه طبق اطلاعات روي برچسب حاوي اين باكتري مي‌باشد. مواد و روش‌ها: با استفاده از سوش استاندارد باسيلوس كواگولانس آزمون PCR بهينه گرديد. حد تشخيص و ويژگي آزمون با استفاده از DNA اين باكتري بررسي شد. تعداد 7 نمونه محصول پروبيوتيك موجود در بازار ايران جمع‌آوري و روش‌هاي مختلف استخراج DNAاز اين محصولات بهينه و باسيلوس كواگولانس از طريق PCR مورد بررسي قرار گرفت. يافته‌ها: آزمونPCR بهينه و محصول Base pair450 (جفت باز) در ژل آگارز 5/1 درصد مشاهده شد، حد تشخيص در اين مطالعه 1000 DNA باكتري در آزمون PCR بدست آمد و با هيچ DNA ديگري در آزمون ويژگي تكثير نگرديد. در تمامي محصولات پروبيوتيك ادعا شده حامل باسيلوس كواگولانس، اين باكتري مشاهده گرديد. نتيجه‌گيري: با توجه به نتايج حاصل از اين پژوهش كه وجود باسيلوس كواگولانس در تمام نمونه‌ها مشخص شد، مي‌توان نتيجه گرفت كه PCR روشي سريع و مطمئن جهت شناسايي اين ميكروارگانيسم در محصولات پروبيوتيك مي‌باشد.

Introduction: Probiotics are microorganisms that if administered in adequate amounts would have beneficial effects on the host's health. Bacillus coagulans is a probiotic bacteria which sometimes mistakenly called Lactobacillus sporogenes. B. coagulans is a gram positive and facultative aerobic and anaerobic, catalase positive, oxidase negative and endospore forming bacteria. The aim of this study is the rapid molecular detection of B. coagulans in various probiotic products. Materials and Methods: PCR test was optimized by using B. coagulans standard strain. Limit of detection (LOD) and specificity of this test were investigated by using related species of DNA. Samples of probiotic products which contain B. coagulans were collected from the Iranian market and various methods of DNA extraction were optimized for these products. Results: Amplicon with the size of 450bp was amplified by PCR test and observed by electrophoresis method. In specificity test none were positive using DNA for intended organisms. B. coagulans species were identified in all the samples by PCR method. Conclusion: According to the results of this study B. coagulans was detected in all samples. It was concluded that PCR is a reliable and accurate method to identify these products that might contain B. coagulans probiotics bactria.