جداسازي، شناسايي بيوشيميايي و مولكولي باكتري هاي پروبيوتيكي از محصولات لبني سنتي سبزوار

Isolation, biochemical and molecular identification of probiotic bacteria from traditional dairy products of Sabzevar

زمينه و هدف: پروبيوتيك ها ميكروارگانيسم هاي غير پاتوژن و مفيدي هستند كه شناسايي آنها در محصولات لبني سنتي نه تنها مي تواند منجر به جداسازي باكتريهاي پروبيوتيكي با خصوصيات ويژه شود، بلكه مي تواند ديدگاه مناسبي براي توليد انبوه محصولات لبني سنتي كه به طور طبيعي حاوي باكتريهاي پروبيوتيكي هستند به ما عرضه كند. مواد و روش ها: پس از نمونه برداري محصولات لبني از مناطق مختلف شهرستان، كشت هاي متوالي بر روي محيط هاي اختصاصي MRS Broth و MRS انجام شد. شناسايي اوليه با رنگ آميزي گرم، تست حركت، تست احياي نيترات، رشد در دماي 15oC و 45 رشد در PH=9.6 و همچنين قابليت تخمير 11 قند بررسي شد. جهت تعيين دقيق سويه مورد نظر، ژن 16SrDNA با جفت آغازگرهاي اختصاصي توسط PCR تكثير داده شد و تعيين توالي گرديد. توالي هاي حاصل بعد از ويرايش، بلاست نوكلئوتيدي شدند. در پايان تست تحمل شرايط اسيدي و صفراوي نيز براي نمونه هاي مثبت مورد بررسي قرار گرفت. يافته ها: پس از انجام كشت هاي متوالي بر روي محيط هاي آگار اختصاصي، 16 سويه باكتري براي آناليزهاي بعدي انتخاب شدند. در شناسايي اوليه سويه ها توسط روش هاي فنوتيپي، 14 نمونه مثبت بودند كه سپس براي شناسايي دقيق تر، ژن 16SrDNA تمام نمونه ها با PCR تكثير داده شد. بعد از شناسايي مولكولي و تعيين توالي ژن 16SrDNA، بلاست توالي ها شباهت بالاي نمونه ها باLactobacillus plantarum را نشان داد. نتايج تحمل شرايط اسيدي و صفراوي نيز نشان داد كه اين باكتريها بهترين رشد را در PH=4 دارا مي باشند و سويه مورد نظر توانايي رشد در حضور نمك صفراوي را دارد. نتيجه گيري: نتايج بيوشيميايي نشان داد كه سويه رايج در محصولات مورد بررسي لاكتوباسيلوس است كه تست هاي مولكولي و تعيين توالي نيز وجود L. plantarum را در محصولات مورد نظر تاييد نمود. همچنين تست تحمل شرايط اسيدي و صفراوي بعنوان مهمترين خصوصيت باكتريهاي پروبيوتيك نشان داد كه سويه مورد نظر توانايي تحمل اين شرايط را دارا مي باشد.