اثرات آنتاگونيستي لاكتوباسيلهاي جدا شده از واژن سگ هاي سالم در مقايسه با آنتي بيوتيك هاي رايج بر روي رشد برخي از پاتوژن هاي مطرح در عفونت هاي رحمي سگ در شرايط آزمايشگاهي

Invitro antagonistic effects of normal vaginal Lactobacilli isolated from healthy bitches on some pathogens related to bitch endometritis in comparison with some commonly used antibiotics

امروزه عفونت هاي رحمي يكي از عارضه هاي اصلي دستگاه تناسلي سگ هاي ماده است. بدين منظور استفاده از لاكتوباسيلها به عنوان پروبيوتيك و به منظور جايگزيني در رحم به عنوان يك عامل باز دارنده از عفونت هاي رحمي به علت توليد متابوليت هايي همچون پراكسيد هيدروژن و اسيد لاكتيك امري مفيد و سودمند است. (8 ) بدين منظور جهت جداسازي لاكتوباسيلها از واژن سگ هاي سالم اقدام به اخذ نمونه با سواب دابل گارد تحت شرايط استريل از 20 قلاده سگ ماده كه ابتدا توسط راديوگراف و تصاوير سونوگرافي و معاينات باليني سلامت آنها تاييد شده بود صورت گرفت. سواب ها پس از اخذ نمونه بلافاصله در محيط MRS - broth قرار داده شده و پس از انتقال به آزمايشگاه ابتدا 48 تا 72 ساعت در شرايط بي هوازي در 37 درجه سانتي گراد انكوبه شدند. سپس از نمونه هاي رشد كرده بر روي MRS - agar اقدام به كشت گرديد و به مدت 48 تا 72 ساعت ديگر در شرايط فوق انكوبه شدند.كلوني هاي رشد نموده بر روي سطح با روش هاي مشاهده مستقيم و آزمون هاي بيو شيميايي و در نهايت توسط PCR و sequencing تشخيص جنس لاكتو باسيل داده شد. پس از آن اقدام به خالص سازي و تكثير لاكتو باسيلها شد. سپس به منظور آزمون تاثير لاكتوباسيلهاي جدا شده بر روي پاتوژن هاي مطرح در عفونت هاي رحمي اقدام به جداسازي سگ هاي مبتلا به عفونت رحمي ارجاع داده شده به مطب هاي دامپزشكي استان البرز جهت اخذ نمونه هاي ترشحات رحمي شد. در ادامه ميزان ناحيه باز دارنده ايجاد شده حاصل از مجاورت جداگانه لاكتوباسيلها و ديسك هاي آنتي بيوگرام با پاتوژن هاي اصلي جدا شده كه شامل Staphylococcus و Pseudomonas aeruginosa و Proteus mirabilis و E. coli و Staphylococcus intermedius و Staphylococcus epidermidis aureus و Trueperella بودند با يكديگر مقايسه گرديد. نتايج نشان دادند كه لاكتو باسيلها بر روي بسياري از باكتريهاي پاتوژن تاثير معني داري را در ايجاد منطقه بازدارنده از رشد در شرايط آزمايشگاهي دارد %83/3 كه در مقايسه با حساسيت كليه ديسك هاي آنتي بيوگرام مورد بررسي كه به ميزان %34/16 بوده است اختلاف معني داري را نشان ميدهد. با توجه به نتايج به دست آمده در شرايط آزمايشگاهي (in vitro) به نظر مي رسد كه به كارگيري لاكتوباسيلها در واژن سگ ها به عنوان عامل پيش گيرانه از عفونت هاي رحمي و يا عاملي در جهت كاهش ابتلا به اين نوع از عفونت ها است و شايد جايگزين مناسبي جهت درمان هاي آنتي بيوتيكي باشد البته مي بايست در شرايط باليني نيز مورد بررسي قرار گيرد

Nowadays the uterine infections are considered as one of the principal disorders of bitch’s reproductive system. For this reason, the utilization of lactobacillus spp. as probiotic and aimed at substituting in the uterus as an inhibiting factor against the uterine infections due to the production of metabolites such as hydrogen peroxide and lactic acid be useful and should be investigated (13). For this reason, in order to isolate the lactobacillus spp. from the vaginas of healthy bitches beings, an attempt was made to obtain specimens using double guard swab under sterile conditions from twenty healthy bitches which had been primarily confrmed through radiograph, ultrasonography and clinical examinations. Subsequent to the acquisition of specimens, the swabs were immediately placed in MRS-broth medium and after transferring to laboratory they were incubated frstly for 48 to 72 hours in anaerobic condition under 37ºc. Thereafter, from the specimens grown on MRS-agar, cultures were prepared and further incubated under above conditions for more 48 to72 hours. Utilizing direct observation, biochemical tests and ultimately PCR and sequencing the genus of lactobacillus spp. was discerned from the colonies grown on the surface. Following this step, the lactobacillus spp. were subjected to isolation and propagation. On the other hand, in a bid to test the effect of isolated lactobacillus on regular pathogens occurring in uterine infections, a certain number of afflicted bitches beings referred to medical clinics existing all over Alborz province were selected for obtaining specimens of uterine secretions. In continuation, the degree of created inhibition zone resulting from separate proximity of lactobacilli and antibiogram discs with main isolated pathogens including Staphylococcus intermedius, E. coli, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa, taphylococcus aureus and Trueperella were compared. The fndings demonstrated that the Lactobacilli had a signifcant effect on a multitude of pathogenic bacteria for the creation of inhibition zone from growth in laboratory conditions. Most of isolated pathogens (83.3%) in the vicinity of 2.5µl of fresh culture medium of Lactobacillus showed susceptibility which indicates a signifcant difference in comparison with susceptibility of all antibiogram discs under investigation (34.16%). In the light of acquired results in laboratory conditions (in vitro), it seems that the application of Lactobacillus spp. in bitch vagina as a preventive factor from uterine infections or as a factor for mitigating the disposition to such infections should also be surveyed under clinical conditions which might possibly be a suitable replacement for antibiotic treatments.