عنوان مقاله :
ساخت ناقل بياني pFUM003 داراي خاصيت ترشح خارج سلولي
عنوان به زبان ديگر :
Construction of pFUM003 expression vector with extracellular secretion properties
پديد آورندگان :
پاك باطن ، بهاره دانشگاه فردوسي مشهد - دانشكده كشاورزي - گروه علوم دامي، مشهد , مجيدزاده هروي، رضا دانشگاه فردوسي مشهد - دانشكده كشاورزي - گروه علوم دامي، مشهد , كرمانشاهي، حسن دانشگاه فردوسي مشهد - دانشكده كشاورزي - گروه علوم دامي، مشهد , سخاوتي، محمدهادي دانشگاه فردوسي مشهد - دانشكده كشاورزي - گروه علوم دامي، مشهد , جوادمنش، علي دانشگاه فردوسي مشهد - دانشكده كشاورزي - گروه علوم دامي، مشهد
كليدواژه :
توالي سيگنال , وكتورهاي ژنتيكي , لاكتوكوكوس لاكتيس
چكيده فارسي :
سابقه و هدف: پروبيوتيكها ميكروارگانيسم‌هاي مفيدي هستند كه در طي قرن‌ها در بهبود مواد غذايي و هم‌چنين ارتقاء سلامت استفاده مي‌شوند. امروزه پروبيوتيك‌هاي نوتركيب به‌عنوان وسيله انتقال براي بيان و انتقال هدفمند مولكول‌هاي بومي يا نوتركيب به سطوح مخاطي دستگاه گوارش در تغذيه و سلامت استفاده مي‌شوند. لاكتوكوكوس لاكتيس يك كانديداي بالقوه براي توليد پروتئين‌هاي زيستي مفيد است. ازآن‌جا كه براي اين باكتري ناقل مناسبي كه داراي توالي سيگنال براي ترشح خارج سلولي باشد وجود ندارد لذا هدف ما از اين مطالعه افزايش راندمان بيان پروتئين‌هاي نوتركيب در خارج از سلول با استفاده از واردكردن توالي سيگنال پپتيد usp45 به ناقل پلاسميدي pBU003 است.
مواد و روش‌ها: usp45 سيگنال پپتيدي داراي 81 باز است كه در مطالعات زيادي به‌عنوان افزايش‌دهنده بيان نيز معرفي شده است. در اين مطالعه توالي سيگنال usp45 ساخته شد و سپس با استفاده از واكنش ليگاسيون به پلاسميد pBU003 انتقال يافت. پس از آن به باكتري اشريشياكلي سويه MC1061 منتقل شد. پلاسميد نوتركيب به pFUM003 نام‌گذاري شد.
يافته‌ها: تعيين توالي پلاسميد حاوي usp45 نشان داد كه داراي ساختار پلاسميدي و توالي سيگنال صحيح است و تطابق كامل با توالي‌هاي الگو (EU382094.1) گزارش شده در بانك ژني NCBI دارد.
نتيجه‌گيري: پلاسميد نوتركيب ساخته شده به pFUM003 نام‌گذاري شد. اين پلاسميد نوتركيب به لحاظ ساختاري صحيح و جهت انتقال به پروبيوتيكها مناسب مي‌باشد
چكيده لاتين :
Introduction: Probiotics are beneficial microorganisms that have been used in food production as well as health promotion over the centuries. Recombinant probiotics are used to express and transfer native or recombinant molecules to mucosal surface of digestive tract to promote efficiency in nutrition and health. Lactococcus lactis is a potential candidate for the production of useful biological proteins. Since there is not any vector nominated for this bacterium to show the extracellular protein secrition properties, therefore the aim of this study was to increase the efficiency of expression and secretion of recombinant proteins by adding transmission signal peptide usp45 to pBU003.
Materials and Methods: usp45 signal peptide has 81 nucleotides and previous studies indicated that it can also cause increase in the gene expression. In this study, after synthesising usp45 signal sequence, it was ligated into pBU003. Then the vector was transformed to Ecoli (MC1061). The recombinant plasmid named pFUM003 after “plasmid Ferdowsi University of Mashhad 003”.
Results: Sequencing of recombinant plasmid containing usp45 showed that the plasmid had correct construction and the inserted sequence had exact match with the reference sequence (EU382094.1) reported in NCBI's GenBank.
Conclusion: The recombinant plasmid was named pFUM003. This recombinant plasmid structurally was correct and can be used to transmit into probiotics make them to benefit from extracellular protein production properties.
