عنوان مقاله :
كلونينگ و توليد فرم مونومر استرپتاويدين نوتركيب و ارزيابي اتصال آن به بيوتين
عنوان به زبان ديگر :
Cloning and production of the monomer form of recombinant streptavidin and appraisal of it`s binding affinity to biotin
پديد آورندگان :
ديده ورا، الهام دانشگاه علوم پزشكي اراك - گروه زيست فناوري و پزشكي مولكولي، اراك , صادقي، عبدالرحيم دانشگاه علوم پزشكي اراك - گروه بيوشيمي و ژنتيك، اراك , ابطحي، حميد دانشگاه علوم پزشكي اراك - مركز تحقيقات پزشكي و مولكولي، اراك
كليدواژه :
استرپتاويدين , همانند سازي مولكولي , اشريشيا كلي
چكيده فارسي :
هدف: استرپتاويدين پروتئيني هموتترامر است كه تمايل اتصال بالاي آن به بيوتين باعث شده در فرآيندهاي بيوتكنولوژي و مطالعات سلولي كاربرد فراواني داشته باشد. اما فرم تترامر آن در بعضي تداخل ايجاد مي‌كند. بنابراين در اين مطالعه با ايجاد جهش حذفي اقدام به توليد فرم مونومر استرپتاويدين گرديد.
مواد و روش‌ها: ابتدا توالي نوكلئوتيدي استرپتاويدين از سايت NCBI گرفته شد و بعد از اعمال جهش در توالي ژن مورد نظر به منظور بيان در باكتري E.coli بهينه و سنتز گرديد. براي كلون كردن ژن از سويه E.coli DH5α و براي بيان ژن استرپتاويدين از سويه E.coli BL21 (DE3) pLysS استفاده شد. تخليص پروتئين با كيت
Ni-NTA انجام شد و توسط HABA dye تمايل اتصال استرپتاويدين به بيوتين مورد سنجش قرار گرفت.
يافته‌ها: فرم مونومر استرپتاويدين در ميزبان بياني E.coli BL21 (DE3) pLysS توليد و تخليص گرديد. استرپتاويدين مونومر نوتركيب داراي تمايل اتصال مناسب به بيوتين بود.
نتيجه‌گيري: با ايجاد جهش در توالي پپتيدي استرپتاويدين مي‌توان به فرم مونومر آن دست يافت كه داراي تمايل اتصال مناسب به بيوتين باشد.
چكيده لاتين :
Introduction: Streptovidine is a homo troterameric protein that has a high biotin tendency to use in biotechnology and cellular studies. But its tetramer form interferes in some Measurements. Therefore, in this study, with a deletion mutation, a form of Streptovidine monomer was produced.
Materials and Methods: Firstly, the streptavidin nucleotide sequence was taken from NCBI site and after mutation in the sequence of the gene was optimized for expression in E.coli bacteria. Correspondingly, in order to clone the gene, E. coli DH5α strain and to express the streptavidin gene E. coli BL21 (DE3) pLysS were used. Purification of protein was performed with Ni-NTA kit and by HABA dye, the tendency of binding of streptavidin to biotin was measured.
Results: Streptovidine monomer form was produced and purified in E.coli BL21 (DE3) pLysS expression host. The recombinant Streptovidine monomer has a tendency for binding to biotin.
Conclusion: By creating a mutation in the streptavidin peptide sequence, it can be obtained in the form of a monomer that has a tendency for binding to the biotin.
