كلون، بيان، تخليص و بررسي آنتي‌ژنيسيته نواحي آنتي‌ژنيك پروتئين MOMP كلاميديا تراكوماتيس

Cloning, expression, purification and antigenicity of antigenic region of MOMP protein from Chlamydia trachomatis

هدف: كلاميديا تراكوماتيس انگل داخل سلولي اجباري، گرم منفي و يكي از شايع‌ترين عوامل عفونت‌هاي جنسي مي‌باشد. پروتئين MOMP بيش از 60% پروتئين‌هاي خارج غشايي را شامل مي‌باشد كه نشان‌دهنده اهميت اين پروتئين براي شناسايي باكتري كلاميديا تراكوماتيس مي‌باشد. هدف از مطالعه، توليد پروتئين نوتركيب متشكل از نواحي آنتي‌ژنيك پروتئين MOMP از ژن omp1 و بررسي آنتي‌ژنيسيته آن مي‌باشد. مواد و روش‌ها: در اين مطالعه، قطعه‌هاي داراي بالاترين خاصيت آنتي‌ژنيك ژن omp1 به طول bp674 بر اساس برنامه‌هاي بيوانفورماتيكي به دست آمد و با لينكر انعطاف‌پذير به هم متصل شدند. سپس در ناقل پلاسميدي pET32a كلون و بيان شد پس از خالص‌سازي پروتئين نوتركيب، آنتي‌ژنيسيته آن با استفاده از وسترن‌بلات با سرم افراد آلوده به كلاميديا بررسي شد. يافته‌ها: بر اساس نتايج به دست آمده، در تمام نمونه‌هاي سرمي بيماران مبتلا به عفونت‌هاي كلاميديايي، باندهاي مربوط به واكنش آنتي‌ژن با آنتي‌بادي در كاغذ نيتروسلولز مشاهده مي‌شود. در عين حال هيچ باندي مبني بر واكنش آنتي‌بادي با آنتي‌ژن در نمونه‌هاي سرم افراد سالم مشاهده نگرديد. نتيجه‌گيري: داده‌ها نشان مي‌دهد كه ناحيه آنتي‌ژنيك پروتئين MOMP در اشريشياكلي بيان مي‌شود. اين پروتئين توسط سرم افراد مبتلا به عفونت كلاميديا تراكوماتيس شناسايي مي‌شود. بنابراين پروتئين نوتركيب داراي اپيتپ‌هاي مشابهي با پروتئين طبيعي است.

Introduction: Chlamydia trachomatis is an obligate intracellular parasites, gram-negative bacteria and also is one of the most common sexually transmitted infections. Correspondingly, the MOMP protein contains more than 60% of the extra-membrane proteins, which indicates the importance of this protein for the detection of Chlamydia trachomatis. The purpose of the study is to produce recombinant protein composed of antigenic regions of the MOMP protein and its antigenicity. Materials and Methods: In this study, the regions with the highest antigenic property of the omp1 gene, with a length of 674 bp, were obtained based on bioinformatics software's and linked with flexible linker. Then, it was cloned and expressed in plasmid vector pET32a. After purification of the recombinant protein, its antigenicity was evaluated using Western blot technique with serum of infected people with Chlamydia. Results: Based on the results, in all serum samples of patients with chlamydial infections, antibody response bands were observed in nitrocellulose paper. Anyway, no antibody response band was detected in the serum samples of healthy people. Conclusion: Data showed that antigenic region of MOMP protein can be expressed by in E. coli . This protein was recognized by sera patients suffering from Chlamydia trachomatis infection. Conclusively, the recombinant protein has similar epitopes and close antigenic properties to the natural form of this antigen.