جداسازي و تشخيص دو گونه استافيلوكوس از آب‌هاي شور استان گلستان

Comparison of biochemical and Molecular Methods in Isolation and identification of Halophilic bacteria from saline Lake Inche boroun, Almagol and Ajigol in Golestan Province

درياچه‌هاي شور با محدوده شوري نزديك به آب دريا، محيط‌هاي پرشور بوده اما اغلب داراي طيف وسيعي از عوامل ميكروبي مي‌باشند. هدف از اين مطالعه جداسازي باكتري‌هاي هالوفيل و بي­نهايت هالوفيل از آب‌هاي شور اينچه­برون، آلماگل، آجي گل با دو روش بيوشيميايي و مولكولي و همچنين مقايسه كارايي اين دو روش مي‌باشد. سال 1394، از 3 درياچه اينچه برون، آلماگل و آجي گل، تعداد 51 نمونه (هركدام 17 نمونه) از مناطق مختلف با EC و pH متفاوت جمع‌آوري شد. اين ايزوله‌ها بر روي محيط كشت انتخابي Saline nutrient broth كشت داده شدند. ايزوله‌ها براساس مورفولوژي كلني و سلول بررسي شدند. مورفولوژي كلني‌ها با تأكيد بر توليد پيگمان، اندازه كلني و كدورت تعيين شدند. اين خصوصيات از طريق رشد كشت‌ها در EC، pH و غلظت نمك اپتيمم انجام شد. تست­هاي بيوشيميايي كاتالاز، ژلاتيناز، آميلاز، اكسيداز، سيترات، اوره آز، ايندول، وژسپروسكوئر، تخمير/اكسيداسيون (لاكتوز، سوكرز، دكستروز) و روش مولكولي (PCR ژن كروموزومي tuf) انجام شد. براساس تست‌هاي بيوشيميايي و روش مولكولي تعداد 20 ايزوله هالوفيل و بي‌نهايت هالوفيل از آب‌هاي شور اينچه برون، آلماگل، آجي گل جداسازي شد كه فراوان‌ترين گونه استافيلوكوكوس اپيدرمايديس با 9 مورد، پس‌ازآن استافيلوكوكوس كپيتيس مشاهده شد. با مقايسه روش بيوشيميايي و مولكولي مشاهده شد كه تست‌هاي بيوشيميايي در 9 مورد قادر به تشخيص گونه نبودند و بر اين اساس، روش مولكولي به نسبت روش بيوشيميايي از كارايي بالاتري برخوردار مي‌باشد. محيط‌هاي پرشور به علت سختي شرايط زندگي، از تنوع زيستي كمتري نسبت به محيط‌هاي معتدل برخوردارند؛ اما ازنظر حضور ميكروارگانيسم‌هاي نمك دوست و تحمل‌كننده نمك، تنوع بالايي دارند و انواعي از نمك دوست‌هاي نسبي و تحمل‌كننده‌هاي نمك در اين محيط‌ها وجود دارند.

Saline lakes with a salinity level close to that of seawater are extreme environments with a broad spectrum of microbial agents. The present study aimed at Comparison of biochemical and Molecular Methods in Isolation and identification of Halophilic bacteria from saline Lake Inche boroun, Almagol and Ajigol in Golestan Province. 51 samples were obtained from different regions of the above-mentioned lakes (seventeen samples from each lake) with varying EC and pH within a 4 month period from February to May 2015. The isolates were cultured on Saline nutrient broth and selected for a better identification. They were determined in terms of colony and cell morphology. Colony morphologies were specified with emphasis on pigment production, colony size, and turbidity. The properties were evaluated by culture growth in optimum EC, pH, and salinity. Biochemical tests of catalase, gelatinase, amylase, oxidase, citrate, urease, indole, Voges-Proskauer, fermentation/oxidation (lactose, sucrose, dextrose) and also PCR (tuf gene) were performed and the capability of producing the above-mentioned four enzymes was determined. According to the biochemical tests and molecular method, 22 halophile and extreme halophile isolates were separated from saline waters of Inchehboroun, Almagol, and Ajigol lakes where Staphylococcus epidermidis and Staphylococcus capitis were the most abundant species, respectively. Furthermore, three strains were able to produce the four enzymes; two strains belong to Staphylococcus capitis and one belongs to Staphylococcus hominis. Due to harsh living condition, saline environments have limited biological diversity compared to the so-called temperate environments. However, saline environments possess a high level of biological diversity in terms of halophile and halotolerant microorganisms with variety of relative halophiles and halotolerants living in these environments.