رديابي و شناسايي ويروس موزاييك يونجه (AMV) به وسيله آزمون تكثير هم دماي وابسته به حلقه

Tracking and identification of Alfalfa Mosaic Virus (AMV) by Loop mediated isothermal amplification assay

ويروس موزاييك يونجه (Alfalfa mosaic virus، AMV) در ايران كه سبب بيماري در محصول يونجه (Medicago sativa) مي شود، بر اساس خصوصيات مورفولوژيكي و بيان علايم شناسايي تشخيص داده مي شود. روش هاي متعددي جهت تشخيص اين ويروس وجود دارند كه مي توان به آزمون هاي سرولوژيك و روش هاي مولكولي اشاره كرد. آزمون نسخه برداري معكوس تكثير هم دماي وابسته به حلقه (revers transcription loop mediated isothermal amplification) روش جديدي جهت تكثير RNA تحت شرايط هم دما، با اختصاصيت، حساسيت، سرعت و كارايي بالا است كه در اين پژوهش جهت تشخيص ويروس موزاييك يونجه به كار گرفته شد. به منظور انجام آزمون سرولوژيك، نمونه هاي برگي (100 نمونه) با علائم مشابه به ويروس موزاييك يونجه از سطح استان هاي همدان و كردستان جمع آوري شدند. چهار آغازگر واكنش RT-LAMP (شامل F3، B3، FIP و BIP) به همراه آغازگرهاي واكنش RT-PCR (شامل F و B) بر اساس توالي بسيار حفاظت شده اي از ژن پوشش پروتئين (CP) طراحي شدند. جهت انجام آزمون هاي مولكولي، RNA كل استخراج و واكنش هاي مولكولي انجام شدند و در نهايت شش نمونه مثبت تشخيص داده شد. از مزاياي اين روش جديد در مقايسه با ساير روش هاي پيشين مي توان به اختصاصيت بالا، حساسيت بالا، سرعت بالا، كارآيي بالا، ايمني، سهولت، عدم نياز به تجهيزات پرهزينه جهت تكثير، عدم نياز به كارهاي تشخيصي بعد از تكثير، تشخيص مشاهده اي و كاربردوستي آن اشاره كرد.

Alfalfa mosaic virus (AMV) causing a disease in Alfalfa (Medicago sativa) crop in Iran has been identified on the basis of determination of symptom expression and morphological properties. There are several techniques to detect the virus including serological test and molecular methods. Reverse transcription Loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP) assay is a novel technique for amplifying RNA under constant temperature, with high specificity, sensitivity, rapidity and efficiency that is used in this study for detection of Alfalfa mosaic virus. Leaf samples (100 samples) with symptoms similar to AMV were collected from Hamedan and Kurdestan provinces and were subjected to a serological test. All four RTLAMP reaction primers (i.e. F3, B3, FIP and BIP) together with RT-PCR reaction primers were designed on the basis of the highly conserved sequence of coat protein (CP) gene. Total RNA was extracted and molecular reactions were carried out and finally was detected six positive sampled The advantages of this new method in compare to other methods include the high specificity, high sensitivity, high rapidity, high efficiency, safety, fascinatingly, no requirement of expensive and tools for amplification, no postamplification treatment of the amplicons, visual detection and user friendly.