مقايسه بيان موقت پروتيين HDA19 در برگ هاي Nicotiana tabacum و Nicotiana bentamiana

Comparison of Transient HDA19 Protein Expression in Leaves of Nicotiana tabacum and Nicotiana bentamiana

اخيراً بيان موقت ژن به منظور فراهم سازي روش هاي بسيار سريع ارزيابي بافت هاي گياهي به عنوان يك منبع توليد پروتيين در مقايسه با روش وقت گير و پرهزينه تراريختي پايدار گياهان گسترش يافته است. مطالعه حاضر بيان موقت پروتيين HDA19 را در دو گونه از گياه tobacco (Nicotiana tabacum وNicotiana bentamiana) نشان مي دهد. براي اين منظور پرايمرهاي اختصاصي براي واكنش زنجيره اي پلي مراز طراحي و براي همسانه سازي ژن HDA19 در وكتور بياني pB2GW7 به كار رفتند. سازه نوتركيب به Agrobacterium tumefaciens strain GV3101 انتقال يافت سپس براي تراريختي موقت گياهان tobacco از طريق اگروباكتريوم استفاده شد. در نهايت وجود ژن هدف در لاين هاي تراريخت اگروباكتريوم از طريق كلوني PCR تاييد گرديد. از طرفي بيان پروتيين در لاين هاي تراريخت توسط روش دات بلات و الايزا تاييد شد. اگرچه روش دات بلات و SDS-PAGE حاكي از تراريختي هر دو رقم بود ولي روش الايزا توليد پروتيين نوتركيب در گياه تراريخت Nicotiana tabacum را تاييد كرد كه 400 ميكروگرم در گرم وزن بافت تر برگ گياه بود. با توجه به يافته هاي فوق اين گياه ميزبان مناسبي براي توليد HDA19 نوتركيب، نماينده اي از پروتيين هاي هيستون داستيلاز، نسبت به Nicotiana bentamiana مي باشد.

Recently, transient gene expression has been developed to provide a more rapid means of assessing plant tissues as a protein production platform without the labor-intensive and timeconsuming process of generating stably transformed transgenic plants. This study reports the expression of HDA19 gene in two species of tobacco plants (Nicotiana tabacum and Nicotiana bentamiana) by means of transient transformation. Specific primers were designed and used for PCR amplification and cloning of HDA19 gene in the plant expression vector pB2GW7. The recombinant construct was transferred into Agrobacterium tumefaciens strain GV3101, and was used for Agrobacterium mediated transformation of tobacco plants. The presence of the desired gene in transgenic lines was confirmed through colony PCR. The expression of the protein in transgenic lines was confirmed by immune-dot blot assay and ELISA. Although the transformation of the two species was confirmed by immune-dot blot assay and SDS-PAGE, recombinant protein production in Nicotiana tabacum plants was confirmed by ELISA and it was estimated 400 µg per gram wet weight of tobacco leaves. According to the results, this species is the appropriate host for the production of recombinant HDA19, one of the histone deacetylases, rather than Nicotiana bentamiana.