شناسايي تنوع ژنتيكي در دو ژن كانديدا TLR2، TNFα و ارتباط آن با بيماري ورم پستان در گاو هلشتاين

Identification of Genetic Variation in two Candidate Genes of TLR2 and TNFα and its Association with Mastitis in Holstain Cattle

ورم پستان يكي از شايع ترين بيماري ها در پرورش گاو شيرده است كه همواره هزينه هاي سنگين درماني را به گاودار تحميل كرده و مقادير توليد شير را بطور معني دار كاهش مي دهد. در مطالعه حاضر شناسايي چند شكلي هاي نوكلئوتيدي در ژن هاي عملكرد سيستم ايمني و ارتباط اين چندشكلي ها با مقادير باقيمانده نمره سلول هاي بدني (SCS) به عنوان شاخص همبسته با بروز بيماري ورم پستان در گاوهاي هلشتاين بررسي شد. اين ژن ها اگزون هاي 1و 2 ژن TLR2 و 3و 4 ژن TNFα بودند. بدين منظور، تعداد 100 راس گاو شيري هلشتاين براساس ارزش هاي اصلاحي تخمين زده شده براي صفات توليد شير، درصد چربي و ركوردهاي SCS انتخاب شدند. سپس براساس مقادير باقيمانده نمره سلول هاي بدني در دو گروه هاي مقاوم و حساس تقسيم شدند و از هر حيوان 5 ميلي ليتر خون جمع آوري شد. تعيين ژنوتيپ دو گروه هدف (حيوانات حساس و مقاوم به ورم پستان) با استفاده از نشانگرPCR-RFLP انجام شد. ارتباط آماري چند شكلي هاي شناسايي شده با ركوردهاي تصحيح شده نمره سلول هاي بدني (مقادير باقيمانده نمره سلول هاي بدني) از طريق رويه GLM با استفاده از نرم افزار SAS نسخه 2/9 بررسي شد و مقايسه ميانگين ها با آزمون توكي-كرامر انجام گرفت. نتايج تحقيق حاضر نشان داد كه بين چند شكلي هاي ژن هاي TLR2 و TNFα با مقادير باقيمانده نمره سلول هاي بدني ارتباط آماري معني دار وجود داشت (001/0P<). بطوري كه براي ژن TNFα بيشترين فراواني ژنوتيپي در گروه هاي مقاوم و حساس به ترتيب مربوط به ژنوتيپ هاي AA و BB بودند. همچنين، براي ژن كانديداي TLR2 فراواني ژنوتيپ KK در گروه حساس بيشتر از گروه مقاوم بود. به عنوان يك نتيجه شايد بتوان از نتايج مشاهده شده براي طراحي برنامه هاي اصلاحي براي پيشگيري از ورم پستان استفاده شود.

Mastitis is one of the most common diseases in dairy cattle, which has imposed therapy heavy costs to farmers through significant reduction in total milk production. Identification of nucleotide polymorphism of two candidate immunity response genes and its effects on SCS as a mastitis incidence indicator was carried out in this research. The genes were exons 1 and 2 of TLR2 and 3 and 4 of TNFα. For this purpose, a hundred Holstein lactating cows were selected based on their breeding values for milk production, fat and somatic cell scores. Then cows based on their residual values for somatic cell scores were divided into two resistant and susceptible groups and 5 ml blood samples were collected from each animal. Selective genotyping of two target groups of susceptible and resistant animals to mastitis was done using PCR-RFLP approach. The association between genetic polymorphisms with corrected records of somatic cell scores (residual values for somatic cell score) were analyzed using the Generalized Linear Model (GLM) procedure of SAS statistical package (version 9.2) followed by means comparison with Tukey-Kramer test. There was a significant direct relationship between TLR2 and TNFα gene polymorphisms and somatic cell score residual values (P<0.001). Furthermore, For TNFα gene the most genotypic frequencies in resistant and susceptible groups were related to genotypes AA and BB, respectively. Also, KK genotype frequency within TLR2 candidate gene showed a higher frequency within susceptible group versus the resistant group. As a conclusion, the obtained results may be used to monitor and design breeding strategy to prevent mastitis