گزارش علمي كوتاه : اولين گزارش از بيماري جاروك توتون در ايران

First report of witches’-broom disease of tobacco in Iran

توتون (.Nicotiana tabacum L) يكي از محصولات اقتصادي و مهم در منطقه برازجان از استان بوشهر است. در بازديد هايي كه در سال 1395 به منظور شناسايي بيماري هاي فيتوپلاسمايي مزارع توتون اين منطقه به عمل آمد در برخي از مزارع توتون بيماري جاروك مشاهده گرديد. علائم بارز اين بيماري عبارت بودند از، غنچه درشتي، گلسبزي، برگساني ( فيلودي)، كاهش فاصله ميانگره ها، زردي بين رگبرگي، ريزبرگي، جاروك و كوتولگي (شكل 1). از تعداد شش بوته توتون داراي علائم و سه بوته بدون علائم با روش ژانگ و همكاران Zhang et al. 1998 دي.ان.اي كل استخراج گرديد. دي.ان.اي كل استخراج گرديد. جهت بررسي آلودگي فيتوپلاسمايي نمونه هاي دي.ان.ا استخراج شده، از آزمون PCR مستقيم با استفاده از جفت آغازگر Deng & Hiruki 1991, Schneider et al. 1995) P1/P 7) و آزمون PCR دو مرحله اي با استفاده از جفت آغازگر هاي P1/P7 دور اول و Gundersen & Lee 1996)R16F2n/R16R2) در دور دوم استفاده شد. در آزمون هاي PCR مستقيم و دو مرحله اي به ترتيب قطعاتي با اندازه ي تقريبي 1800 و 1200 جفت باز از اپرون آر.ان.اي ريبوزومي تكثير گرديد. تحت همين شرايط چنين قطعاتي از گياهان شاهد و بدون علايم تكثير نشد. محصول PCR هاي مستقيم همسانه سازي و تعيين ترادف شد تشابه نوكلئوتيدي ترادف هاي نمونه هاي به دست آمده 100 % بود و بخشي از ترادف ژن ار . ان . اي ريبوزومي16s d يك نمونه از آن ها تحت رس شمار kx962288 در بانك جهاني ترادف ها GenBank ثبت شد. جستجو با برنامه Blast نشان داد كه فيتوپلاسماي عامل جاروك توتون بيشترين نزديكي را با فيتوپلاسماهاي گروه جاروك بادام زميني witches’-broom, 16SrII Peanut دارد. آناليز فيلوژنتيكي با استفاده از نرم افزار MEGA 7 نشان داد كه فيتوپلاسماي عامل جاروك توتون با فيتوپلاسماهاي گروه 16 طبقه بندي مي شودو بيشترين نزديكي را با زيرگروه 16SrII طبقه بندي مي شود و بيشترين نزديكي را با زيرگروه C دارد. با استفاده از برنامه RFLP (Zhao et al. 2009) iPhyClassifier مجازي قطعه تكثير شده (با جفت آغازگر (R16F2n/R16R انجام شد و در نتيجه تعلق فيتوپلاسماي عامل جاروك توتون برازجان را به زير گروه C گروه 16 تاييد نمود . اين اولين گزارش از وجود بيماري جاروك توتون در ايران مي باشد.

Tobacco (Nicotiana tabacum L.) is an economically important crop in Borazjan (Bushehr province, Iran). In 2016 surveys conducted in tobacco fields of Borazjan for phytoplasma diseases, tobacco witches’-broom (TWB) disease was observed. The main disease symptoms were big bud, flower virescence and phylllody, internode shortening, inter veinal yellowing, little leaf, leaf curl, witches’-broom and stunting. Total DNA was extracted from six symptomatic and three symptomless tobacco plants using Zhang et al. (1998) procedure. For phytoplasma detection DNA samples were tested in direct polymerase chain reaction (PCR) using phytoplasma primer pair P1/P7 (Deng& Hiruki 1991, Schneider et al. 1995) or nested PCR using the same primer pair followed by R16F2n/R16R2(Gundersen & Lee 1996) primers. Amplicons of 1.8 and 1.2 kb, respectively were amplified in samples of symptomatic plants but not in symptomless ones. All P1/P7 primed amplicons were cloned and sequenced. The obtained 16S rDNA sequences showed 100% sequence identity with each other and a representative of these sequences deposited in GenBank (KX692288). Blast search showed that TWB phytoplasma shared maximum homology (99%) with 16SrII phytoplasma strains. Phylogenetic analysis using MEGA7 showed that TWB phytoplasma clustered with16SrII group phytoplasmas closest to 16SrII-C subgroup. Virtual RFLP analysis using iPhyClassifier (Zhao et al. 2009) confirmed that the TWB phytoplasma belongs to 16Sr group II, subgroup C. To our knowledge this is the first report of association of a 16SrII phytoplasma with TWB disease in Iran.