خاموش كردن بيان ژن كدئين رداكتاز به‏روش خاموش‌سازي القايي با ويروس در گياه دارويي شقايق (Papaver somniferum L.)

هدف: گياه دارويي شقايق (Papaver somniferum L.) تنها منبع تجاري از آلكالوئيدهاي دارويي بنزوفنانترين از زير گروه آلكالوئيدهاي بنزيل ايزوكوئينولين  است كه  شامل مسكن­هاي ضد درد مانند كدئين و داروهاي نيمه مصنوعي اكسي كدون، باپرنورفين و نالتروكسون مي­باشد. اگرچه بيشتر ژن­هاي مسير اين آلكالوئيدها شناسايي شده­اند، ولي تنظيم پس از نسخه­برداري ژن­هاي مسير آلكالوئيدهاي آن‏ها به­خوبي شناسايي نشده است. خاموش سازي القايي با ويروس (virus induced gene slencing) يكي از روش‏هاي سريع براي خاموشي ژن است كه در اين تحقيق از اين روش براي بررسي خاموشي يكي از ژن‏هاي مهم مسير آلكالوئيدهاي اين گياه استفاده شد.مواد و روش‏ها: در اين تحقيق به‏­منظور كاهش سيستماتيك در سطوح بيان ژن آنزيم­هاي مسير توليد آلكالوئيدهاي بنزيل ايزوكوئينولين از VIGS استفاده شد. جهت خاموشي ژن كدئين رداكتاز (Codeinone Reductase) از ناقل pTRV جهت همسانه­سازي استفاده شد. انتقال آگروباكتري حاوي سازه مورد نظر به برگ­هاي 2 تا 3 هفته­اي با استفاده از روش اگرواينفيلتراسيون انجام شد.نتايج: نتايج همسانه­سازي اين ژن با استفاده از روش­هاي مختلف مولكولي همانند PCR و هضم آنزيمي مورد تاييد قرار گرفت. ترا ريختگي گياهان تلقيح شده با سازه ژنتيكي مورد نظر با استفاده از PCR اثبات شد. تعيين سطوح نسخه­برداري ژن هدف با استفاده از فن PCR نيمه كمي و PCR در زمان واقعي نشان داد كه بيان ژن   COR حدود 89 درصد كاهش يافته است.نتيجه‌گيري: نتايج اين تحقيق نشان داد كه با استفاده از روش تداخل RNA، بيان ژن كدئين رداكتاز به‏صورت معني‌داري در مقايسه با شاهد كاهش بيان داشت.