بيان القايي ژن گزارشگرGFP در رده سلولي LMH با استفاده از ناقلين لنتي ويروسي القا پذير

هدف: با تلفيق سيستم االقايي تتراسيكلين (Tetinducible system) و ناقلين لنتي ويروسي، القا بيان ژن گزارشگر Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) در سلول‏هاي پرندگان مورد بررسي قرار گرفت. مواد و روش‏ها: ژن EGFP تحت كنترل سيستم‏ TetON قرار گرفت و بيان آن در سلول هاي كبدي جوجه رده LMH بررسي شد. ابتدا باكتري‏هاي مستعد با ناقل لنتي ويروسي القايي حامل EGFP به‏همراه يك ناقل دوم كه فعال كننده Tet (Tettransactivator) به‏نام rtTAM2 را حمل مي‏كرد ترانسفورم شده و ذخيره ماكسي پرپ خالصي از هريك از اين‏دو DNA پلاسميدي فراهم شدند. سپس با روش رسوب DNAفسفات كلسيم سلول‏هاي LMH با ذخيره هردو پلاسميد ترانسفكت شد. در مرحله بعد، غلظت‏هاي سريالي از آنالوگ Tet يعني داكسي سيكلين را به محيط كشت سلول اضافه نموديم به‏‏طوري‏كه با افزايش غلظت DOX، بيان EGFP بيشتر القا گرديد. نتايج: افزايش غلظت داكسي سايكلين افزايش بيان را به دنبال داشت. در 24 ساعت اول بعد از ترانسفكشن بيان به‏ترتيب براي غلظت‏هاي 0 ، 0/01 ، 0/1 و 1 ميكروگرم بر ميلي‏ليتر داكسي سايكلين 0/4، 6/2 ، 10/3 و 16 درصد و در 24 ساعت دوم به‏ترتيب 6/4 ، 26 ، 3/28 و29/2 بود.با اين .جود، افزايش بيش از حد غلظت داكسي سايكلين باعث مرگ سلول­ها گرديد. نتيجه گيري:  تلفيق سيستم‏هاي القايي Tet با منشا باكتريايي و لنتي ويروس‏هاي نوتركيب مرتبط با انتقال ژن به سلول‏هاي انساني مي‏تواند باعث القا ژن در سلول‏هاي پرندگان شود. غلظت القا كننده بر ميزان القا بيان ترانسژن تاثير مستقيم مي‏گذارد.