جداسازي و شناسايي مولكولي باكتري هاي همراه با اسفنج Pachychalina sp با پتانسيل تصفيه زيستي نفت خام

Isolation and Molecular Identification of Oil Degrading Bacteria Associated with Pachychalina sp. Sponge

هدف از اين تحقيق، جداسازي و شناسايي مولكولي باكتري‌هاي همراه با اسفنج با پتانسيل تجزيه زيستي نفت خام مي باشد. بافت مزوهيل اسفنج Pachychalina sp. هموژنيزه شده و رقت هاي مختلف آن در محيط كشت هاي مناسب كشت داده شد. كلني هاي به دست آمده بر اساس شاخص امولسيون سازي و ميزان رشد در محيط حاوي 2% نفت غربالگري شدند. از بين باكتري هاي جداسازي شده، 6 باكتري بالاترين ميزان رشد در محيط نفتي را دارا بودند كه ميزان حذف نفت توسط 6 سويه مذكور در محيط نمكي حداقل مورد سنجش قرار گرفت. سويه ها همچنين بر اساس توالي ژن SrRNA 16 و با انجام PCR مورد شناسايي مولكولي قرار گرفتند. نتايج حاصل از بررسي درصد حذف نفت بر اساس دو روش جذب در 420 نانومتر و ميزان وزن خشك تاييد كننده يكديگر بوده و هر دو از يك الگو پيروي نمودند. بر اين اساس، سويه هاي KE5 و KE8 بيشترين ميزان حذف نفت را نشان دادند كه نتايج شناسايي مولكولي اين دو سويه مشخص نمود بيشترين شباهت را به ترتيب با سويه هاي Staphylococcus aureus subsp.N315 و Luteimonas terricola BZ92r دارا مي باشند. با توجه به نتايج به دست آمده از همترازي هاي ژنومي، تعيين فاصله ژنتيكي و رسم درخت فيلوژنتيكي، به نظر مي رسد سويه هاي KE6 و KE7 به ترتيب با داشتن 86% و 90% شباهت با سويه هاي Exiguobacterium sp. AT1b و Pseudomonas rhodesiae CIP 104664 پتانسيل قابل توجهي براي انجام مطالعات بيشتر مولكولي و بيوشيميايي دارا بودند.

The aim of this study was to isolate and molecular identification of associated bacteria in sponges, with potential ability of biodegrading crude oil. Serial dilutions of homogenized Pachychalina sp. mesohyl were cultured in suitable medium for growth of marine microorganism. Obtained colonies were screened based on emulsification index and growth in medium containing 2% oil. Six strains which showed the highest growth rate and emulsification index were tested for the amount of oil removal in the minimal salt medium. Also the molecular identification was done Based on the 16SrRNA sequence and PCR. Removal of oil based on two methods; dry weight and absorption at 420 nm confirmed each other and both followed the same pattern. Accordingly KE5 and KE8 strains showed the highest degree of oil removing and molecular identification results revealed that they were most similar to strains of Staphylococcus aureus subsp. N31 and Luteimonas terricola BZ92r respectively. Also according to the results of bioinformatics analysis, it seems KE6 and KE7 respectively with 84% and 90% similarity with Exiguobacterium sp. AT1b and Pseudomonas rhodesiae CIP 104664 strains, have considerable potential for further molecular and biochemical studies and there is the possibility of introducing them as new strains.