همسانه ‌سازي و بيان ژن آلكان هيدروكسيلاز از باكتري Pseudomonas putida

Pseudomonas putida يك باكتري هتروتروف بوده كه قابليت رشد روي طيف وسيعي از سوبستراها كه عمده آن ها آلكان ها هستند، دارا مي باشد. توانايي تجزيه طيف وسيعي از هيدروكربن‌ها، نشان‌دهنده برتري اين ارگانيسم نسبت به اعضاي ديگر جامعه ميكروبي تجزيه كننده نفت مي باشد. باكتري P. putida داراي سيستم آلكان هيدروكسيلاز (ژن alk-B) براي تجزيه آلكان‌ها مي‌باشد. هدف از اجراي تحقيق حاضر جداسازي و بيان ژن آلكان هيدروكسيلاز باكتري P. putida مي باشد. براي اين منظور ابتدا همسانه‌سازي در پلاسميد p.Bluescript انجام شد و سپس ناحيه كدكننده ژن مذكور در پلاسميد pET-26a وارد شد. بيان ژن خارجي در سويه BL-21 از باكتري E. coli صورت پذيرفت. فعاليت آنزيم نوتركيب حاصله با تفاوت جذب اسپكتروسكپي در اثر اكسيد كردن NADPH تعيين شد. نتايج حاصل از اين تحقيق نشان داد كه ژن آلكان هيدروكسيلاز در پلاسميد p.Bluescript به‌خوبي جايگزين گرديد، كلني PCR نيز اين امر را تاييد كرد. ژن مربوطه به‌خوبي در وكتور pET-26a كلون شد. با افزايش زمان پس از القاء با IPTG، بيان پروتئين آلكان هيدروكسيلاز افزايش يافت. پروتئين نوتركيب حاصله داراي فعاليت آنزيمي مناسب مي باشد. انتقال اين ژن به باكتري سريع الرشد و سوبستراي غذايي وسيع مي تواند نويد بخش توليد بيوكاتاليزوري با كارايي برتر باشد.