همسانه سازي و بيان ژﻥ پيلين باكتري Xanthomonas citri subsp.citri

بيماري شانكر باكتريايي مركبات توسط باكتري Xanthomonas citri subsp. citri (Xcc) ايجاد مي شود. سيستم ترشحي نوع سه اين باكتري داراي يك ساختار خارج سلولي رشته‏اي است كه پروتئين هاي باكتريايي را به داخل سلول گياه وارد مي كند. پروتئين پيلين (HrpE) جزء اصلي تشكيل دهنده پيلوس مي باشد كه توسط ژن HrpE كد مي‏شود. توليد پادتن اختصاصي عليه پروتئين پيلين مي‏تواند به منظور شناسايي گياهان آلوده و همچنين به عنوان منبع ژنتيكي مقاومت عليه بيماري مورد استفاده قرار گيرد. غير‏فعال‏سازي پروتئين HrpE با استفاده از پادتن مي‏‏تواند منجر به سركوب بيماري در گياه شود. هدف از اين تحقيق جداسازي و بيان ژن HrpE و خالص‏سازي پروتئين حاصل از آن بود. براي اين منظور، قطعه ژني HrpE با استفاده از آغازگرهاي اختصاصي جدا و در ناقل pTZ57R/T همسانه‏سازي شد. بيان اين ژن به‏صورت نوتركيب در ناقل pET28a(+) و در سويه Rosetta باكتري Escherchia coli انجام شد. بهينه‏سازي توليد پروتئين نوتركيب تحت تاثير زمان‏هاي مختلف، دماي نگهداري و همچنين غلظت‏هاي مختلف القا‏كننده مورد بررسي قرار گرفت. بيشترين مقادير بيان در دماي 30 درجه سلسيوس و طي زمان 16 ساعت و با IPTG يك ميلي‏مولار به‏دست آمد. خالص‏سازي پروتئين نوتركيب HrpE با استفاده از روش كروماتوگرافي تمايلي بر روي ستون نيكل صورت پذيرفت. نتايج آزمون‏هاي الكتروفورز پروتئين و وسترن بلاتينگ با استفاده از پادتن‏هاي اختصاصي، صحت بيان و خالص‏سازي پروتئين نوتركيب پيلين را مورد تاييد قرار دادند. پروتئين نوتركيب توليد شده مي‏تواند به عنوان آنتي‏ژن براي توليد پادتن‏هاي تخصصي تك همسانه‏اي و چند همسانه‏اي مورد استفاده قرار گيرد.