تثبيت همزمان آنزيم هاي آلفا-آميلاز و مالتوژنيك آميلاز با روش تجمع آنزيمي نانو مغناطيسي جهت تهيه مالتوز از نشاسته ذرت

در اين تحقيق تثبيت همزمان آنزيم هاي آلفاآميلاز و مالتوژنيك آميلاز با روش تجمع آنزيمي با اتصالات جانبي روي نانوذرات مغناطيسي عامل دار شده با ليزين جهت تهيه شربت با مالتوز بالا از نشاسته ذرت انجام شد. نانوذرات مغناطيسي 4O3Fe به روش هم رسوبي تهيه و سپس پوشش دهي سطح با اسيد آمينه ليزين انجام گرفت. حلال هاي استو نيتريل ، استن ، ترتبوتانول ، ايزوپروپانول ، اتانول و سولفات آمونيوم اشباع شده به عنوان عوامل تجميع كننده آنزيم ها مورد آزمون قرار گرفتند كه حلال ترت بوتانول بالاترين فعاليت آنزيمي را جهت تثبيت نشان داد . نسبت آنزيمي 1:9( مالتوژنيك آميلاز : آلفاآميلاز)، pH مطلوب برابر با 6 و دماي 65 درجه سانتي گراد ، گلوتر آلدئيد با غلظت 2 ميلي مولار ، و نسبت ليزين به آنزيم برابر با 0.75 :1 به عنوان شرايط ايده آل جهت تثبيت تعيين گرديدند. نتايج آناليز DLS نشان داد كه متوسط اندازه ذرات نانومغناطيس در محدوده 88.9- 81.9 نانومتر با انديس PDI برابر با 0.242 و پتانسيل زتاي 21 و متوسط اندازه ذرات آنزيم تثبيت شده در محدوده 110.5 -99.6 نانومتر با انديس PDI برابر با 0.088 و پتانسيل زتاي 32 قرار دارد. ظهور طيف هاي جديد مربوط به2NH و NH در طيف سنجي FTIR تاييدي بر تثبيت آنزيم روي نانوذرات مغناطيسي بود. علاوه بر اين آنزيم تثبيت شده پس از 10 سيكل پي در پي ميزان 80.36 % از فعاليت خود را حفظ نمود. پارامتر هاي سينتيكي آنزيم تثبيت شده در مقايسه با آنزيم آزاد نشان داد كه Vmax تغيير معني داري را نداشته اما، Km 1.5 برابر كاهش داشته است. نيمه عمر آنزيم تثبيت شده دردماى 95 درجه سانتي گراد نسبت به آنزيم آزاد حدود 2.5 برابر افزايش نشان داد. ميزان بارگذاري آنزيم تثبيت شده روي نانوذرات مغناطيسي 82% تعيين گرديد.