تشخيص هم‌زمان باكتري‌هاي بيماري‌زاي ليستريا منوسايتوژنز، اشرشيا كلي O157:H7 و جنس سالمونلابه روش multiplex PCR در سبزيجات آماده مصرف

آلودگيهاي باكتريايي مواد غذايي يكي از مهمترين مسائل در زمينه ايمني مواد غذايي ميباشد.لذا استفاده از روشهاي تشخيصي سريع و دقيق حائز اهميت است. يكي از مهم ترين اين روشها، تكنيك مولكولي PCR است كه امكان تشخيص دقيق و با حساسيت بالا در مدت زمان كم، از مزاياي آن است. اما در صورتيكه تشخيص چندين باكتري بيماريزا مد نظر باشد،multiplex PCR (mPCR)بهترين گزينه خواهد بود. در اين تحقيق از سه باكتريليستريا منوسايتوژنز، اشرشيا كلي O157:H7و جنس سالمونلا (سالمونلا انتريكا سرووار تيفي موريوم) كه از باكتريهاي بيماريزاي مهم منتقل شده از طريق آب و مواد غذايي هستند استفاده شد و به كاهو، كه نمونه اي از سبزيجات پر مصرف در تهيه سالاد هاي آماده است، تلقيح و با روش mPCR بطور همزمان شناسايي شدند. بدين منظور مخلوطي از پرايمر هاي اختصاصي مربوط به باكتريها يعني، invA( پروتئين تهاجميA)براي جنس سالمونلا با 284 جفت باز، prfA(پروتئين افزايش دهنده نسخه برداري از ژنهاي عامل ويرولانس) براي ليستريا منوسايتوژنزبا 217 جفت باز وrfb (ژن مسئول توليد آنتي ژنO157) براياشرشيا كلي O157:H7با 420 جفت باز،به همراه DNAاستخراج شده از مخلوط سه باكتري تلقيح شده به كاهو و ساير معرف هاي واكنشPCR به يك لوله واكنش، منتقل و همزمانPCRشدند. با اين روش، امكان تشخيص همزمان سه باكتري بيماريزاي فوق با حساسيت cfu/g1امكان پذير شد.