كشت بافت تخمدان ماهي طلايي (carassius auratus)

Ovary culture of Goldfish Carassius auratus

در اين تحقيق كشت اوليه وكشت هاي مجدد اول و دوم (ساب كالچر اول و ساب كالچر دوم) بافت تخمدان ماهي طلايي carassius auratus به منظور ايجاد يك مدل آزمايشگاهي از سلول هاي تخمدان اين گونه انجام شد. يك عدد ماهي قرمز به وزن 42 گرم و طول 7 سانتيمتر با پودر گل ميخك (0.2g/lit) بي هوش شد و تخمدان آن از بدن خارج و در يك ظرف پتري حاوي 5 ميلي ليتر محيط كشت l-15، استرپتومايسين سولفات (200μg/ml )، پني سيلين پتاسيم جي (200μg/ml) و آمفوتريسين (5μg/ml )b منتقل شد. تخمك ها كه در مرحله پيشرفته رسيدگي (مرحله iv) بودند از تخمدان جدا شدند و تخمدان به وسيله يك سرنگ 5 ميلي ليتري به تكه هاي كوچك تر تبديل شد. تكه هاي كوچك بافت تخمدان در 5 ميلي ليتر محيط كشت 15%، l-15 سرم گوساله جنيني (fbs)، استرپتومايسين سولفات (100μg/ml)، پني سيلين پتاسيم جي ( 100μg/ml) و آمفوتريسين (2.5μg/ml )b تحت دماي 25 درجه سانتيگراد كشت داده شدند. بعد از گذشت دو هفته و تشكيل مقدار كافي لايه سلولي بر روي كف فلاسك كشت، سلول ها با محلول pbs حاوي آنتي بيوتيك ها شستشو شدند، از كف فلاسك كشت سلول از طريق تيمار با trypsin-edta (0/25 درصد) جدا گرديدند و مجدداً در 5 ميلي ليتر محيط كشت 15% ، l-15 سرم گوساله جنيني (fbs)، استرپتومايسين سولفات (100μg/ml)، پني سيلين پتاسيم جي (100μg/ml) و آمفوتريسين (2.5 μg/ml)b تحت دماي 25 درجه سانتيگراد كشت داده شدند. پس از تشكيل مقدار كافي لايه سلولي بر روي كف فلاسك كشت، در روز پانزدهم همين مراحل براي انجام ساب كالچردوم نيز تكرار شد. سلول هاي حاصل از كشت اوليه و ساب كالچرهاي اول و دوم بافت تخمدان ماهي قرمز همگي سلول هاي شبه فيبروبلاست (fibroblast-like) بودند.

In this study primary culture, subculture1 and subculture2 of ovarian tissue from goldfish was done to develop an in vitro system of ovarian cells in this species. A goldfish weighing 42g and 7 cm in length was anesthetized by Clove powder (0.2 g/lit) and its ovary was removed and put in a petri dish containing 5ml L-15 medium, Streptomycin sulphate (200 ug/ml), Penicillin G potassium (Gibco, 200 iu/ml) and Amphotericin B (5 ug/ml). The oocytes which were in advanced maturation stage (IV) were isolated from ovary and the ovary cut into small pieces (explants) by a 5ml syringe. The ovary explants cultivated in 5ml L-15 medium supplemented with 15% FBS, Streptomycin sulphate (100 ug/ml), Penicillin G potassium (Gibco, 100 iu/ml) and Amphotericin B (2.5 ug/ml) at 25°C. After two weeks when confluent monolayer formed on the bottom of the flask, the cells were washed with PBS containing antibiotics, dislodged by Trypsin-EDTA solution (0.25%) and cultured in 5ml of L-15 medium, FBS (15%), antibiotics at 25 °C (first subculture). After confluent monolayer formation, on the sixteenth day similar procedure was followed for the second subculture.The emerging cells from explants and two subcultures exhibited fibroblast-like cells.