جداسازي و آناليز فيلوژنتيكي يك جدايه ويروس پيچيدگي برگ شلغم از گياه تاتوره

Isolation and phylogenetic analysis of the jimsonweed isolate of Turnip curly top virus

ويروس پيچيدگي برگ شلغم (Turnip curly top virus,TCTV) به­ عنوان ويروس تيپ جنس Turncurtovirus از خانواده Geminiviridae چند سال قبل از ايران گزارش گرديد. اين ويروس داراي دامنه ميزباني وسيعي در ميان سبزيجات و علف‌هاي هرز است. در اين پژوهش، آلودگي گياه تاتوره (Datura stramonium L.) با علائم زردي عمومي، پيچيدگي شديد و فنجاني شدن برگ‌ها با استفاده از آزمون پي سي آر، به TCTV اثبات گرديد. سپس طول كامل ژنوم ويروس با تلفيق پي سي آر و روش تكثير دايره غلتان (rolling circle amplification, RCA) و استفاده از يك جفت آغازگر همپوشان تكثير و بعد از همسانه‌سازي، در ناقل pJET1.2 تعيين ترادف گرديد و ترادف بدست آمده به لحاظ فيلوژنتيكي مورد تجزيه و تحليل قرار گرفت. نتايج بدست آمده بيانگر آن است كه جدايه تاتوره داراي بيشترين و كمترين ميزان شباهت (بترتيب 99/2 و 85/8 درصد) با جدايه‌هاي همين ويروس مي‌باشد كه پيشتر بترتيب از گياهان شلغم و ترب گزارش شده‌اند. به رغم مشابهت بالاي ترادف نوكلئوتيدي ژنوم جدايه تاتوره با جدايه شلغم، پروتئين rep رمزشده توسط جدايه تاتوره در انتهاي N-terminal داراي 14 اسيدآمينه بيشتر است. در ميان نژادهاي پنج گانه TCTV، جدايه تاتوره متعلق به نژاد C بوده و در كنار جدايه‌هائي قرار مي‌گيرند كه قبلا از گياه شلغم يا از بدن زنجرك‌ها گزارش شده است. نتايج اين تحقيق، بار ديگر دامنه ميزباني وسيع تِرنكِرتوويروس‌ها در علف‌هاي هرز و نقش آن­ها را در آلودگي سبزيجات تائيد مي‌كند.

Turnip curly top virus (TCTV) is a type member of the genus Turncurtovirus previously reported from Iran. TCTV has a wide host range among vegetables and weeds. In this study, the TCTV infection of the symptomatic jimsonweed (Datura stramonium L.) showing general yellowing, severe curling and cup-shaped leaves was confirmed by PCR. Full-length genome of this isolate was amplified using combination of the PCR and rolling circle amplification (RCA) and cloned into the pJET1.2 vector. Resulted nucleotide sequence indicated that the jimsonweed isolate of TCTV shares maximum and minimum identities (85.8-99.2%) with turnip and radish isolates of TCTV, respectively. In spite of high similarity between full-length nucleotide sequence of jimsonweed and several GenBank isolates, predicted rep protein of the jimsonweed isolate has an additional 14 amino acid residues at the N-terminal. Among five TCTV strains, the jimsonweed isolate was classified in the strain C with turnip and leafhopper isolates of the virus. Results of this study again confirm wide host range of turncurtoviruses in weeds and the role of wild species in infection of vegetables.