سلول هاي بنيادي عصبي مغز تاس ماهي ايراني (Acipenser persicus): تعيين درجه حرارت بهينه، كشت طولاني مدت و ايمنوسيتوشيمي

Neural stem cells from Persian sturgeon (Acipenser persicus): Determining optimum temperature, long-term culture and immunocytochemistry

كشت سلولي مغز ماهيان داراي پتانسيل بالايي در بررسي واكنش‌هاي مختلف به مواد سمي، نوترينت‌ها و عوامل رشد مي‌باشند. در اين تحقيق، به منظور بررسي امكان تهيه كشت طولاني مدت از مغز تاس ماهي ايراني، شناسايي سلول هاي بنيادي عصبي و تعيين درجه حرارت بهينه رشد سلول ها، بخش‌هاي جلويي (لوب بويايي)، مياني (لوب بينايي) و عقبي (مخچه) مغز تاس ماهي ايراني به طور مجزا در محيط DMEM/F12 حاوي FBS٪15، پني سيلين-استرپتومايسين و آمفوتريسين در انكوباتور (25 درجه سانتي-گراد، CO2٪5) قرار داده شدند. سلول‌هاي به‌دست آمده غالبا دوكي شكل بودند. در بين سلول‌هاي كشت داده شده از بخش‌هاي مختلف مغز، سلول‌هاي بخش عقبي مغز پس از طي بيش از 8 ماه و 9 پاساژ همچنان به رشد و تكثير خود ادامه مي‌دهند. به منظور تعيين درجه حرارت بهينه رشد سلول‌هاي مغز تاس ماهي ايراني، سلول‌ها در درجه حرارت‌هاي 20، 22، 25 و 28 درجه سانتي‌گراد قرار گرفته و تعداد سلول ها در هر تيمار دمايي جهت ارزيابي شرايط رشد بررسي گرديد. بالاترين رشد سلول‌ها در شرايط آزمايشگاهي در درجه حرارت 25 درجه سانتي‌گراد مشاهده گرديد. به منظور حفظ ذخيره سلولي، كشت‌هاي به‌دست آمده در ازت مايع منجمد شدند. به‌منظور شناسايي سلول‌هاي بنيادي عصبي، واكنش پذيري سلول‌هاي حاصل از كشت بخش عقبي مغز با ماركر آنتي نستين بررسي گرديد كه در اين ميان، ٪11 سلول‌ها واكنش مثبت نشان دادند. با توجه به پايداري بالاي كشت هاي به دست آمده از ناحيه عقبي مغز، مي توان از آن در زمينه هاي تحقيقاتي مختلف همچون شناسايي ويروس، اكوتوكسكولوژي و بيان ژن استفاده نمود.

Cell culture from fish brain have high potential in investigation of different responses to toxins, nutrients and growth factors. In the present study, to investigate the possibility of preparing long-term culture from Persian surgeon brain, characterization of neural stem cells and determining optimum temperature for the growth of cells, the front (olfactory lobe), middle (optic lobe) and rear (cerebellum) regions of Persian sturgeon brain were placed separately in the medium of DMEM/F12 with 15% FBS, penicillin-streptomycin and amphotrisin in incubator (250C, 5%Co2). The obtained cells were mostly fusiform. Cells from rear part of the brain are still alive after more than 8 months and 9 passages. To determination of optimum temperature for the growth of Persian sturgeon brain cells, cells were exposed to temperatures 20, 22, 25 and 280C and the number of cells in each temperature treatment was investigated for surveying growth condition. The highest growth and proliferation of cells were observed at 250C. To maintain cell stocks, the cultures were cryopreserved in liquid nitrogen. To characterization of neural stem cells, reactivity of cells from rear part of the brain with anti-nestin marker was investigated, that 11% of cells were immunopositive. According to the high stability of cultures from rear part of the brain, it can be used in different research areas such as virus characterization, ecotoxicology and gene expression.