بررسي پلي مورفيسم ژن VEGF405CG در جمعيت مبتلايان ديابت نوع دوم در استان مازندران

The Study of VEGF405CG Gene Polymorphisms Involved in Type II Diabetes Patients in the Population of Mazandaran Province

ديابت نوع 2 شايع ترين نوع ديابت بوده و 90 درصد موارد اين بيماري را به خود اختصاص داده است. رايج ترين پلي مورفيسم ژن (VEGF405CG) درناحيه غير قابل ترجمه 5UTR است كه پلي مورفيسم 405CG احتمالا در سطح بيان پس از ترجمه ي ژن تاثير داشته و سبب افزايش محصول ژني ميشود .VEGF يك فاكتور آندوتليوم رگي است كه به عنوان يك فاكتور قوي آنژيونيك و نفوذپذيري مويرگي ،نقش مهمي را در بيماري زايي DR بازي ميكند. لذا ممكن است VEGF405CGكانديد مناسبي براي استعداد به ديابت تيپ 2 باشد. هدف از اين پژوهش، تعيين ارتباط بين اين ژن با بيماري­هايي چون ديابت نوع 2 در جمعيت استان مازندران مي­باشد. نمونه­ هاي مورد آزمايش، شامل 50 فرد مبتلا و50 فرد سالم مراجعه كننده به آزمايشگاه­ هاي تخصصي آتيه و شهيد بابايي مي­باشند. كه حدود 1 سي­سي خون حاوي پلاسماي EDTA (CBC) از 50 فرد مبتلا و 50 فرد سالم به عنوان كنترل پس از كسب رضايت آگاهانه گرفته شد. براي تعيين مقدار و كيفيت DNA، كه مرحله بسيار مهمي در روش RFLP مي­باشد، از دو روش ارزيابي كمي به روش اسپكترفتومتري و ارزيابي كيفي به روش الكتروفورز استفاده شد. جهت تخمين غلظت DNA، 4 ميكروليتر از محلول پايه DNA با يك ميكروليتر بافر نمونه­گذاري مخلوط و در چاهك ژل آگارز 1/5 درصد در بافر TAE يك برابر تخليه گرديد. براي ارزيابي محصول PCR روي ژل آگارز 2 درصد انجام شد. 5 ميكروليتر از محصول هر يك از واكنش­ها به همراه 1 ميلي­ليتر رنگ به چاهك­هاي ژل منتقل و الكتروفورز در ولتاژ 100 ولت به مدت 1/5 ساعت انجام شد. ژل در محلول اتيديوم برمايد (0/5 ميلي­گرم بر ميلي­ليتر) به مدت 20 دقيقه رنگ­آميزي شد و پس از انتقال به آب مقطر، با دستگاه ژل داك عكس‌برداري شد. اين مطالعه ارتباط چنداني بين پلي­مورفيسم VEGF405CGدر بين مبتلايان ديابت نوع دو نشان نمي­دهد و نياز به مطالعه بيشتر در جمعيت­ هاي مختلف براي شناخت بهتر نقشVEGF405CGمي­ باشد.

Type 2 diabetes is the most common diabetes and includes about 90% of all diabetic cases in the world. The most common gene polymorphism (VEGF405CG) is in the untranslated region of 5UTR, 405CG polymorphism probably has an effect on the level of expression after the gene translation and increases the gene products. VEGF is a vascular endothelium factor that plays an important role in DR pathogenicity as an angiogenic and capillary permeability factor. Therefore, VEGF405CG may be a good candidate for potential of catching diabetes type 2. The purpose of this study was to determine the relationship between this gene and diseases such as type 2 diabetes in the population of Mazandaran province. The tested specimens consisted of 50 patient and 50 healthy people referring to the Atieh and Shahid Babaei laboratories. About 1 ml of blood containing EDTA (CBC) from 50 patient and 50 healthy individual was taken as a control after obtaining informed consent. In order to determine the amount and quality of DNA, which is a very important step in the RFLP method, spectrophotometric and electrophoresis method were used for quantitative and qualitative evaluation, respectively. To estimate the concentration of DNA, 4 μl of the base DNA solution was mixed with 1 μl of the sampler buffer and in a well, 1.5% agarose gel was evacuated in TAE buffer. A PCR product was evaluated on an2 % agarose gel. 5 μl of product of each reaction with 1 ml of color transferred to gel wells and electrophoresis was performed at a voltage of 100 V for 1.5 hours. The gel was stained in ethidium bromide solution (0.5 mg/ml) for 20 minutes and after transferred to distilled water was photographed with gel dock. This study does not show any association between VEGF405CG polymorphism among type II diabetic patients and further study is needed in different populations to better understanding the role of VEGF405CG.